[发明专利]新的HPV抗原表位

说明书

本发明涉及新型HPV抗原表位，其序列为选自SEQ ID NO：1‑5的氨基酸序列或与选自SEQ ID NO：1‑5的序列具有至少80％同一性的氨基酸序列。本发明还涉及将所述抗原表位用于检测样品中是否存在抗HPV特别是高危型HPV的抗体以及用于检测受试者中的HPV特别是高危型HPV的感染情况。

发明领域

本发明涉及新型HPV抗原表位及其用途。

发明背景

食管癌在世界范围内肿瘤发病率位居第8位。在中国，食管癌的主要组织学类型为食管鳞癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC)。食管鳞癌的发生为环境因素与遗传因素相互作用的结果，其中环境因素包括饮食习惯、吸烟、饮酒等，并且可能与病毒感染相关。

感染是肿瘤发生的因素之一，2008年由感染而导致的肿瘤占所有肿瘤的16.1％。其中人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)是一种重要的致癌病毒。文献报道90％的宫颈鳞状细胞癌与HPV感染有关，且在口咽鳞状细胞癌中也存在一类与HPV感染有关的亚类。此外有研究报道在食管腺癌中HPV的检出阳性率高达66.7％，且与疾病严重程度相关。

人的一生中感染HPV的可能性超过80％，然而仅高危型HPV(hr-HPV)可能引发恶性肿瘤。hr-HPV包括HPV16、18、33、58等，其中HPV16是宫颈鳞癌和口腔鳞癌中最为常见的病毒亚型之一。hr-HPV的编码蛋白包括早期蛋白(包括E1～E8)和晚期蛋白(包括衣壳蛋白L1、L2)。hr-HPV的致癌作用主要依赖于其致癌蛋白E6、E7的作用，二者可激活不可再生细胞的DNA合成、抑制细胞死亡、阻碍细胞分化。

食管鳞癌与宫颈鳞状细胞癌、口咽鳞状细胞癌从组织学上均起源于鳞状上皮，且食管与口咽部毗邻，因此HPV可能通过口咽部下行至食管，而hr-HPV在食管鳞癌中的感染率与潜在关联是研究热点之一。尽管存在动物模型的证据，但hr-HPV在人食管鳞癌中检出率有巨大差异。同时由于HPV病毒颗粒广泛存在于环境中，在检测过程中容易由于操作不当引入环境中的hr-HPV DNA，污染样本而引起假阳性。故hr-HPV的检测需要严格的实验室操作要求。

大多数病毒感染属于“一过式感染”，病毒颗粒在感染后1～2年就会由于被免疫系统清除而无法通过检测病毒核酸的方式被检测到。然而，病毒感染可通过刺激免疫系统产生记忆T细胞或记忆B细胞的形式在体内留下印记，这些印记在体内存在的时间可长达数十年。因此通过检测血清中病毒抗体的存在，可以了解病毒的累积感染情况，避免由于病毒被清除而造成的低估。

已有研究通过血清学手段检测食管鳞癌中HPV的感染情况，但大部分检测目标是血清中抗HPV病毒样颗粒(Vesicle-like Particles，VLP)的抗体，而检测抗癌蛋白E6、E7抗体则非常少见。研究认为血清抗E6、E7抗体是HPV感染导致肿瘤的高度特异性标志，其水平被认为是头颈癌中一个敏感的预后标志。因此检测血清中抗E6、E7抗体较检测VLP抗体更具有临床意义。

目前的血清学检测手段主要通过ELISA方法检测。ELISA方法主要合成重组蛋白以捕捉血清中的目标抗体。免疫系统识别抗原的关键是抗原表位，而非整个蛋白。使用抗原表位足以捕捉血清中的抗体，避免蛋白非表位部分造成的干扰，提高检测效率。同时与合成整个重组蛋白相比，合成抗原表位费用较为低廉，可降低前期投入成本。此外，可将不同蛋白的抗原表位整合至一张膜或芯片上，提高检测通量。目前针对HPV的抗原表位研究主要在衣壳蛋白L1、L2上，并已形成以hr-HPV L1、L2为靶点的预防性疫苗，用以预防宫颈鳞癌等HPV感染而导致的肿瘤。然而针对hr-HPV癌蛋白E6、E7的抗原表位未见报道。因此，目前仍然存在对于检测血清中HPV相关抗体的改进方法的需要。

发明内容

本发明通过提供新的HPV抗原表位来解决本领域中存在的上述问题。