[发明专利]一种碱性磷酸酶催化的化学发光底物

说明书

技术领域

本发明涉及一种与碱性磷酸酶发生催化反应的化学发光底物，属于化学发光免疫分析检测的技术领域。

技术背景

化学发光酶疫分析包含了免疫化学反应和化学发光反应两个部分。免疫分析系统是将酶标记在抗原或抗体上，经过抗原与抗体特异性反应形成抗原－抗体免疫复合物。化学发光分析系统是在免疫反应结束后，加入酶的发光底物，化学发光物质经酶催化后，形成一个处于激发态的中间体，会发射光子释放能量以回到稳定的基态，发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测。待测物质浓度因为与发光强度成一定的关系而实现检测目的。

碱性磷酸酶在化学发光酶疫分析应用比较广泛，目前使用最多的发光底物是1，2－二氧环己烷，主要是AMPPD及其衍生物。此类物质大多为国外专利产品，价格昂贵、不易购买，且一般到达平台期时间长（＞10分钟）。

碱性磷酸酶能催化二氢吖啶磷酸酯类化合物反应并产生化学发光，此种反应速度快，发光到达平台期时间短，但是灵敏度较低（≤10^-6moL）。

因此，亟待开发出一种配方简单、价格比国外产品便宜、到达平台期时间短、灵敏度高的化学发光底物，以提高临床免疫检测速度，缩短检测时间。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明公开了一种配方简单、价格比国外产品便宜、到达平台期时间短、灵敏度高的碱性磷酸酶的化学发光底物。

本发明涉及的发光底物在和碱性磷酸酶混合后，被碱性磷酸酶催化产生不稳定的中间态化合物，此中间态化合物回归到基态时会发出450nm的光，发光底物中添加的表面活性剂，在中间态化合物周围形成胶束增加发光率，金属离子保持碱性磷酸酶的活性，提高催化效率，还原剂可维持发光底物的稳定。这些方式可以提高发光底物的灵敏度和稳定性。

一种碱性磷酸酶催化的化学发光底物，其特征在于：它含有化合物Ⅰ：3,6-(二甲胺基)吖啶，化学结构式如下：

进一步的，它还含有化合物Ⅱ：9-（3’-乙氧苯基硫代磷酸氧亚甲基）-10-甲基-9,10-二氢化吖啶二钾盐，化学结构式如下：

进一步的，它还含有表面活性剂，所述表面活性剂优选Triton X-100、Triton X-405、吐温-80中的一种或多种，所述表面活性剂最优选的为Triton X-100。

进一步的，它还含有还原剂，所述还原剂优选二硫苏糖醇（DTT）、β-巯基乙醇、亚硫酸钠、抗坏血酸中的一种或多种，所述还原剂最优选的为二硫苏糖醇（DTT）。

进一步的，它还含有缓冲体系，所述缓冲体系优选Tris-盐酸缓冲体系或2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲体系，所述缓冲体系最优选的为Tris-盐酸缓冲体系。

进一步的，它还含有金属离子以维持碱性磷酸的活性，优选的锌离子、镁离子。

进一步的，所述化合物Ⅰ的浓度为10mg/L～100mg/L，优选的浓度为25mg/L～50mg/L。

进一步的，所述化合物Ⅱ的浓度为100mg/L～1g/L，优选的浓度为200mg/L～500mg/L。

进一步的，所述表面活性剂的浓度为0.01%～0.1%，优选的浓度为0.01%～0.05%。

进一步的，所述还原剂剂的浓度为0.1%～1%，优选的浓度为0.1%～0.5%。

进一步的，所述缓冲体系的浓度为10mM/L～500mM/L，PH值为7.0～9.0，优选的浓度为50mM/L～200mM/L，PH值为8.0～8.5。

进一步的，所述金属离子的浓度为1mM/L～10mM/L，优选的浓度为1mM/L～5mM/L。

本发明一种与碱性磷酸酶发生催化反应的化学发光底物，含有3,6-(二甲胺基)吖啶、9-（3’-乙氧苯基硫代磷酸氧亚甲基）-10-甲基-9,10-二氢化吖啶二钾盐、碱性蓝54、表面活性剂、还原剂等，本发明的化学发光底物液配方简单、价格比国外产品便宜、到达平台期时间短（＜2sec）、灵敏度高（≥10^-19moL）。

附图说明

图1为4种不同发光底物到达平台期时间对比图。

具体实施方式

下面结合实例进一步说明本发明，本发明的优点和特点将被描述的更清楚。但是，应该可以理解，本实例仅仅是本发明的一种范例，并不会对本发明的范围做任何限制。

实施例1

YJAPS的配方1（PH8.0），具体见表1：

表1