[发明专利]特异性结合人的5T4抗原的全人源单域抗体及其应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及特异性结合人的5T4的全人源单域抗体和其抗原结合片段，以及它们的应用，如癌症的诊断和治疗。本发明公开了针对人的癌胚抗原5T4(h5T4)的全人源单域抗体及其抗原结合片段。其主要特征在于此单域抗体是由存在于抗体重链基因可变区中的互补决定区(complementarity‑determining region，CDR)特异性基因序列决定的，并在原核和真核细胞中获得有效表达的特异性结合5T4的抗体。利用此抗体CDR区或部分或全基因，可在原核和真核细胞及任何表达系统中改造和生产不同形式的基因工程抗体，可用于制备在临床上诊断或治疗肿瘤相关疾病的制剂。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及特异性结合人的5T4的全人源单域抗体和其抗原结合片段，以及它们的应用，如癌症的诊断和治疗。

背景技术

基于抗体的免疫治疗在治疗多种癌症中是非常有效的，而开发成功的免疫治疗主要取决于发现肿瘤细胞中优先表达的细胞表面蛋白的抗体。研究显示了胚胎滋养层细胞和恶性肿瘤细胞具有一些共同的生理过程，包括局部组织的入侵和免疫监视的逃逸，这一特性使得许多在滋养层细胞和肿瘤细胞共同表达的抗原被发展为肿瘤特异性免疫治疗的靶点，其中人的5T4抗原，是表达于胚胎滋养层细胞的糖蛋白，在多种实体瘤中高度表达，而正常组织中却很少存在，被认定是一种肿瘤相关抗原。据报道，对于肠癌，胃癌和卵巢癌患者，相关研究表明肿瘤的恶性程度和预后性与5T4的表达程度密切相关。有研究通过比较人类和小鼠的 5T4序列，发现该分子在两个物种之间是高度保守的，跨膜区域和胞质部分的氨基酸一致性水平达到81％。因此，5T4蛋白是这些肿瘤特异性免疫治疗的潜在靶点。

基于现有技术的基础，本申请的发明人拟提供特异性结合人的5T4抗原的全人源单域抗体及其应用。

与本发明相关的现有技术有，

[1]Zhao Y,Wang Y.5T4oncotrophoblast glycoprotein:janus molecule inlife and a novel potential target against tumors.Cell Mol Immunol,2007；4(2):99-104.

[2]Southall PJ,Boxer GM,Bagshawe KD,et al.Immunohistologicaldistribution of 5T4antigen in normal and malignant tissues.Br J Cancer.1990；61(1):89-95.

[3]Ying T,Du L,Ju TW,et al.Exceptionally potent neutralization ofMiddle East respiratory syndrome coronavirus by human monoclonal antibodies.JVirol. 2014；88(14):7796-805.。

发明内容

本发明的目的在于基于现有技术的基础，提供特异性结合人的5T4抗原的全人源单域抗体及其应用。

本发明公开了特异性结合h5T4的全人源单域抗体。本发明的全人源单域抗体包括n501和n502。本发明还公开了这些抗体的抗原结合片段，双特异性抗体，与效应分子的免疫偶联物，及融合蛋白。

本发明进一步提供了上述的抗体和组合物用于制备肿瘤的诊断或治疗制剂中的用途。

在本发明的一些实施方案中，所述的单域抗体重链可变区的氨基酸序列，包含至少一个(如三个)n501和n502的重链可变区的CDR区；其中，

SEQ ID NO:1是n501重链可变区的氨基酸序列；

SEQ ID NO:2是n501重链可变区CDR1的氨基酸序列；