[发明专利]3;3’-二吲哚甲烷提高脐带间质干细胞旁分泌和治疗皮肤损伤的用途

说明书

本发明涉及3,3’‑二吲哚甲烷（3,3′‑diindolylmethane，DIM）提高脐带间质干细胞旁分泌和治疗皮肤损伤的用途，属于中药用途技术领域；具体涉及的是DIM能够提高提高脐带间质干细胞的旁分泌和治疗皮肤烧伤修复的效果；本发明所述的DIM对可以使脐带间质干细胞的干细胞特性得到显著地的提升，提高其向其他类型细胞分化的能力，同时可以促进脐带间质干细胞IL‑6、IL‑8、G‑CSF等旁分泌因子的增加，最终提高脐带间质干细胞在皮肤烫伤中的修复作用，这一发现拓展了DIM的应用范围，提高了脐带间质干细胞促进皮肤组织再生的能力，具有广阔的临床应用前景。

技术领域

本发明涉及3,3’-二吲哚甲烷（3,3′-diindolylmethane，DIM）提高脐带间质干细胞旁分泌和治疗皮肤损伤的用途，属于中药用途技术领域。

背景技术

皮肤损伤是日常生活常见的一种创伤。皮肤损伤也是常见的战伤之一，占战伤的10%-30%，在核战争中的可达到90%。烧烫伤具有高发病率和死亡率。目前大面积的皮肤损伤治疗主要通过全身支持治疗、创面的清理及结痂切除和外科植皮等方法，传统的治疗方法虽然有一定效果但其结痂深度难于把握、皮源紧张和易感染的问题有待解决。

近年来，以干细胞特别是间质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）为基础的皮肤再生医学研究得到广泛关注，研究表明MSC主要旁分泌促生长的细胞因子进而促进皮肤创伤的修复，在烧烫伤的修复中具有广阔的临床应用前景。然而，MSC注射体内后治疗效果受其存活率和旁分泌生长因子多少的影响，因此试图提高MSC细胞的旁分泌能力和增殖扩增能力是进一步提高其治疗效果的关键。目前提高细胞干性和促再生能力的主要是通过基因改造的方法，但是基因编辑的不确定性导致其改造后的干细胞具有安全性的问题。近年来，通过药物刺激来达到改造干细胞的研究越来越引起人们的重视。

3,3’-二吲哚甲烷（DIM）提取自十字花科蔬菜的天然化合物，它是吲哚-3-甲醇（I3C）的体内二聚产物，属于吲哚芥子油苷的一种。目前对DIM的研究主要集中在其肿瘤治疗的作用，其抗肿瘤的机制包括：调控肿瘤细胞的凋亡、增殖、细胞周期及肿瘤细胞中关键的信号通路。在组织再生方面，DIM具有促进肝脏和急性肺损伤修复的作用，但是，申请人前期的研究表明，低浓度的DIM具有促进胃癌细胞生长的作用，因此直接应用DIM存在着安全性的副作用，由此寻找一种既能体现DIM的促组织再生作用又能防止其副作用的方法是十分必要的。本发明首次将DIM作用于脐带间质干细胞，发现DIM预处理的脐带间质干细胞具有更好的旁分泌和促进皮肤烫伤修复的作用。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺陷而提供一种能够提高人脐带间质干细胞特性和旁分泌作用的新方法和新药物。经验证，DIM具备能够促进hucMSC向脂肪细胞和骨细胞分化的能力，能够促进hucMSC细胞分泌IL-6、IL-8、Wnt11等促进皮肤组织再生的因子的作用。

本发明涉及的DIM预处理的脐带间质干细胞具有更好促进皮肤烫伤修复的作用。实验证明DIM刺激后的脐带间质干细胞更好地促进大鼠皮肤烫伤的创面愈合、更好地促进其表皮的再生化、皮肤细胞增殖再生能力等作用，具有极佳的临床应用价值。

本发明涉及的DIM对脐带间质干细胞预处理的步骤具体操作如下：

（1）脐带间质干细胞的原代培养：依据已经建立的脐带来源间质干细胞的方法进行分离培养，并进行多向分化和流式指标的鉴定（Qiao Chun et al. Human mesenchymalstem cells isolated from the umbilical cord. Cell Biol Int. 2008 Jan;32(1):8-15.）

（2）应用二甲基亚砜（DMSO）对DIM进行稀释（DIM为疏水性药物，需要DMSO进行助溶），稀释到500 mM浓度的母液，后将此浓度的DIM再应用DMEM细胞培养液（含有胎牛血清）进行稀释到应用浓度；