[发明专利]一种脂肪酶的固定化方法

权利要求书

1.一种脂肪酶的固定化方法，其特征在于所述方法为：将脂肪酶、蛋白连接肽和壳聚糖结合域氨基酸序列依次连接成脂肪酶融合蛋白，通过农杆菌侵染法将脂肪酶融合蛋白转化水稻，获得含有脂肪酶融合蛋白基因的转基因水稻种子，将水稻种子提纯，获得脂肪酶融合蛋白溶液；将壳聚糖加入体积浓度1％的乙酸水溶液中，充分溶解，形成胶状液；将胶状液滴加到1mol/L的NaOH水溶液中，形成球形颗粒，水洗至中性，干燥后作为固体载体；然后将固体载体加入脂肪酶融合蛋白溶液中，28℃静置2h，用去离子水淋洗干净，室温干燥，得到固定化脂肪酶；所述脂肪酶氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示，所述蛋白连接肽的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示，所述壳聚糖结合域氨基酸序列为SEQ ID NO.3所示。

2.如权利要求1所述脂肪酶的固定化方法，其特征在于所述脂肪酶融合蛋白转化水稻是构建含有由水稻胚乳特异性启动子介导的脂肪酶融合蛋白表达框和植物转化筛选标记的水稻遗传转化载体。

3.如权利要求2所述脂肪酶的固定化方法，其特征在于所述水稻胚乳特异性启动子的核苷酸序列为SEQ ID NO.5所示。

4.如权利要求1所述脂肪酶的固定化方法，其特征在于所述水稻种子提纯的方法为：将水稻种子脱壳，加入20mM、pH8.0的Tris -HCL缓冲液中匀浆处理，匀浆后振荡提取2小时，静置后取上清液，将上清液采用300-500目的过滤网过滤，取滤液，即脂肪酶融合蛋白溶液。

5.如权利要求1所述脂肪酶的固定化方法，其特征在于所述壳聚糖分子量1.05×10⁶，所述的乙酸水溶液体积用量以壳聚糖质量计为50ml/g。

6.如权利要求1所述脂肪酶的固定化方法，其特征在于所述脂肪酶融合蛋白溶液体积用量以固体载体质量计为100ml/g。