[发明专利]一种聚乙二醇修饰干扰素蛋白质的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种聚乙二醇修饰干扰素蛋白质的方法。

技术背景

干扰素(英文名称为interferon，简称为IFN)是一种由人体细胞分泌的在同种细胞上具有广谱抗病毒活性的蛋白质，具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等多种生物学活性,其活性发挥受细胞基因组的调节和控制并涉及RNA和蛋白质的合成。

目前，干扰素是应用广泛且临床效果显著的治疗性药物，其广谱抗病毒、抗肿瘤及免疫调节功能，在病毒性疾病治疗中有不可取代的作用，但普通干扰素用于临床治疗时，通常为胃肠外给药，体内药物代谢的半衰期短,免疫原性强，导致给药间隔短，给药频度高，人体内产生抗体也导致药效降低，难以达到较理想的临床效果。近年来，聚乙二醇修饰技术有效地解决了蛋白质药物的此类缺陷。聚乙二醇(英文名称为interferon，简称为PEG)是一种惰性无毒、可生物降解的有机多聚物，在生物技术和制药领域有着广泛的用途，聚乙二醇修饰技术就是通过共价结合将聚乙二醇连接到活性蛋白质上，蛋白质药物经聚乙二醇化后，空间结构发生改变。聚乙二醇具有空间位阻，将蛋白质表面的抗原决定簇掩盖起来，使蛋白质分子不能与各种细胞表面受体结合，不被机体的免疫系统识别，避免了相应抗体的产生，抑制相应的免疫反应。另外，蛋白质化学修饰之后，修饰剂与蛋白质分子偶联，使得蛋白质的分子量增大，空间结构发生改变。当修饰后的蛋白质分子量达到或超出肾小球滤过作用的阈值时，蛋白质随血液循环进入肾脏后就可以逃避肾小球滤过作用，因而可以在血液循环中停留更长的时间。

蛋白质药物的聚乙二醇化已经成为蛋白类药物的发展方向，虽然通过聚乙二醇对蛋白质药物进行修饰可以获得种种优点，但是蛋白质药物修饰是一个复杂的过程，很多因素对蛋白质的化学修饰反应会造成较大的影响。包括修饰剂的选择、修饰反应的条件、修饰后是否易于分离、纯化等等。因此对某一种药物而言,有必要建立其聚乙二醇修饰的最优化方法。现有技术中对干扰素的聚乙二醇修饰，反应后目标产物的回收率较低，成本较高，很难广泛地进行临床应用。

因此，现有技术还有待于更进一步的改进和发展。

发明内容

鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种聚乙二醇修饰干扰素蛋白质的方法，解决了目标产物分离困难的问题。

本发明的技术方案为：将干扰素蛋白质溶液加入装有填料的容器中，搅拌，使蛋白质分子均匀吸附在填料上，过滤得到该填料并加入到含活性聚乙二醇的溶液中，搅拌，使活性聚乙二醇与干扰素蛋白质形成共价键，然后将填料装柱、用缓冲液梯度洗脱分离，并收集聚乙二醇修饰的干扰素蛋白质组分。

上文所述的干扰素蛋白质的浓度为10～20毫克/毫升，优选为10～15毫克/毫升；所述的填料为层析柱填料，为疏水柱填料、离子层析柱填料或亲和层析柱填料之一，优选为疏水柱填料；所述的活性聚乙二醇的分子量在5000～60000之间，优选为分子量在5000～30000之间；所述的缓冲液为pH为2.0～7.0的醋酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液和枸橼酸缓冲液之一，优选为醋酸盐缓冲液；所述的干扰素蛋白质为α-干扰素或γ-干扰素，优选为α-干扰素。

下面通过实施例对本发明作进一步的描述，这些描述并不是对本发明内容作进一步的限定。本领域的技术人员应理解，对本发明的技术特征所作的等同替换，或相应的改进，仍属于本发明的保护范围之内。

具体实施例方式

实施例1

以100毫摩尔pH为6.0的醋酸钠溶液为缓冲液A；将氯化钠加入到A中使得氯化钠浓度为1摩尔/升，以此为缓冲液B；向A中加入活性聚乙二醇10000(mPEG-NHS)，用于配制活性聚乙二醇溶液。所添加的活性聚乙二醇的摩尔量是干扰素摩尔量的4倍。再用缓冲液A平衡柱填料HyperD F S 3次，过滤，加入30毫升浓度为5毫克/毫升的α-干扰素，搅拌3小时，过滤，干燥。

将干燥的柱填料加入50毫升活性聚乙二醇溶液中，搅拌，反应3小时，将填料装入层析柱中。再用缓冲液A淋洗，以除去未反应的活性聚乙二醇及其他杂质。最后，用0～100％的梯度添加缓冲液B，得到聚乙二醇修饰的α-干扰素。

实施例2