[发明专利]一种用于检测口蹄疫病毒A型的引物、试剂盒、使用方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于检测口蹄疫病毒A型的引物、试剂盒、使用方法及其 应用，属于生物技术领域。

背景技术

口蹄疫(aphthaeepizooticae；footandmouthdisease,FMD)是由口蹄疫病毒 引起的一种人兽共患的急性、热性、高度接触性传染病，其临诊特征是在口腔 粘膜、四肢下端及乳等处皮肤形成水疱和烂斑。该病传播迅速，流行面广，成 年动物多取良性经过，幼龄动物多因心肌受损而死亡率较高。口蹄疫广泛流行 于世界各地，造成了巨大的经济损失，各国政府及国际组织高度重视，被列为 全球各国共同商定扑灭的头号法定传染病。随着国际贸易的日趋增加，物质交 流和国际交往越来越频繁，给口蹄疫的预防和控制增加了难度，因此世界各国 都花费大量人力、物力和财力来研究、控制和消灭口蹄疫。

口蹄疫病毒(Foot-and-Mouthdiseasevirus)属于微RNA病毒科中的口蹄疫 病毒属，是RNA病毒中最小的一个。口蹄疫病毒具有多型性、易变异的特点。 根据其血清学特性，可以分为7个血清型，即A、O、C、SAT1(南非I)、SAT2 (南非II型)、SAT3(南非III型)及Asia1型(亚洲1型)。各个血清型间无交 叉免疫现象。每一个血清型又包含若干个亚型，同型各个亚型之间也仅有部分 交叉免疫性。该病毒的这种特性给口蹄疫的防制带来了许多困难。

口蹄疫病毒在患病动物的水疱液、水疱皮、淋巴液及发热期血液内的含量 最高，其次是各组织器官、分泌物、排泄物，可长期存在并向外排毒，退热后 病毒可以出现于乳、粪、尿、泪、涎水及各脏器中。口蹄疫病毒对外界环境的 抵抗力很强，耐干燥。在自然条件下，含毒组织及污染的饲料、饮水、饲草、 皮毛及土壤等所含病毒在数日乃至数周内仍具有感染性。口蹄疫病毒对酸和碱 都特别敏感，在pH3.0和pH9.0以上的缓冲液中，病毒感染性将瞬间消失，2％～4％ 氢氧化钠、3％～5％福尔马林溶液、5％氨水、0.2％～0.5％过氧乙酸或5％次氯酸钠 等均为口蹄疫病毒良好的消毒剂。

口蹄疫是一种传染性极强的传染病，一经发生往往呈流行性，在牧区，多 呈现大流行，疫情一旦发生，可随动物的流动迅速蔓延，经过一定时期后疫情 才逐渐平息。口蹄疫可感染多种动物，偶蹄目动物易感性最高，易感性高低的 顺序依次为黄牛、奶牛、牦牛、水牛、猪、羊、骆驼。

对于口蹄疫的防治目前尚无特效药物疗法，主要采取综合防制措施及对症 疗法。最根本的办法是消除患病动物、带毒动物和彻底消毒，切断传播途径。 因此应加强检疫和口蹄疫监测，以防口蹄疫扩散。

目前，根据流行病学、临诊症状和病例剖检特点可以做出口蹄疫的初步诊 断，但确诊需要进行实验室诊断。病毒的分离与鉴定和血清学诊断是实验室诊 断常用的方法，但较费时费力，耗时较长。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种用于检测口蹄疫病毒A型的引物、 试剂盒、使用方法及其应用，采用本发明的试剂盒，能够在三个小时内做出诊 断，为口蹄疫临床诊断和分子流行病学调查提供一种有效的分子生物学诊断方 法。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种用于检测口蹄疫病 毒A型的引物，所述的引物为引物对FMDA，其中，

上游引物FMDAF：5′-ACACCCTGAGGGATATT-3′

下游引物FMDAR：5′-CATACCGTACAAATGGG-3′。

一种用于检测口蹄疫病毒A型的试剂盒，所述的试剂盒包括引物对FMDA， 其中，

上游引物FMDAF：5′-ACACCCTGAGGGATATT-3′

下游引物FMDAR：5′-CATACCGTACAAATGGG-3′。

所述的试剂盒还包括5×RTBuffer、dNTPs、Taq酶、RNA酶抑制剂、反转 录酶、超纯水、裂解液和冲洗液。

所述的试剂盒还包括阳性对照和阴性对照。

所述的裂解液的组分为：羟基喹啉3～5％(质量分数)、磷酸三氯乙酯 3.2～5.2μM、异硫氰酸苯酯1.5～3.5μM、聚乙烯基吡咯烷酮1.3～3.5％(质量分数)、 氯化钠0.3～0.5M和柠檬酸钠0.6～0.9M。

所述的冲洗液的组分为：三羟甲基氨基甲烷10μM，乙二胺四乙酸1μM，乙 醇60～80％(体积分数)；pH7.0。