[发明专利]一种胱抑素C胶乳增强比浊检测试剂盒及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及免疫学测定分析领域，特别涉及一种胱抑素C胶乳增强比浊检测试剂盒及其用途。

背景技术

自从1985年以来，胱抑素C(cystatin C)已被视为检测肾功能的良好标志物，由于其不受许多生理病理因素的影响，同肾小球滤过率(GFR)的其他标志物相比具有众多优越性。cystatin C在一系列生理病理过程中也发挥着作用，有重要的临床意义。胱抑素C是一种由CST3基因编码的蛋白质，是用于肾功能诊断的良好的标志物，存在于体内的所有核细胞中。胱抑素C可自由滤过肾小球膜，是指示肾小球率过滤(GFR)功能的重要标志。

免疫测定技术的发展可回溯至20世纪中期，此时测量液相免疫凝集致光密度变化的光学技术得以发展。20世纪70年代起出现了微量免疫沉淀测定法，即免疫透射比浊测定和免疫散射比浊测定，自此免疫比浊测定逐渐被广泛应用于临床体液中蛋白质含量检测的领域。免疫透射比浊测定技术被广泛使用在全自动生化分析仪上，免疫散射比浊测定则依托于特定蛋白仪，都实现了高速、灵敏和自动化。

目前比较常用的是胶体金免疫层析法，但此方法敏感性不好，重复性不好，只能用于定性检测，对于临床病人的疗效观察有局限性。胶乳颗粒增强比浊法是目前较准确，稳定的检测方法。透射比浊法(Turbidimetry)：一束光线通过带有微小粒子的悬浮液和胶体溶液时，此溶液受到光散射和光吸收两个因素影响可使光的强度减弱，减弱的程度与溶液中微小粒子的含量成正比，通过测量透射光强度，推导出溶液中待测物质的浓度。以检测抗原为例，在反应液中抗体量足够的情况下，待测抗原越多，形成的抗原抗体复合物也越多，透射光的强度减弱越多，同时与其它物理因素，如抗原抗体反应时间、光源强弱和波长、光检测器与反应杯间的距离等密切相关。但目前的工艺也存在着精密度不好线性相关性不强的问题。

发明内容

针对现有技术中的上述问题，本发明提供了一种胱抑素C胶乳增强比浊检测试剂盒及其用途，所述试剂盒基于胶乳增强免疫透射比浊法(PETIA)，可普遍用于各类全自动生化分析仪分析，使用时所需的测定时间短，特异性好，精密度高，准确度好。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：一种胱抑素C胶乳增强比浊检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括缓冲液，无机盐，表面活性剂，防腐剂，稳定剂及干扰消除蛋白；所述试剂R2包括缓冲液，无机盐，表面活性剂，防腐剂，稳定剂及聚苯乙烯胶乳颗粒混合物；所述聚苯乙烯胶乳颗粒混合物交联有抗胱抑素C抗体；

所述聚苯乙烯胶乳颗粒混合物为大直径聚苯乙烯胶乳颗粒和小直径聚苯乙烯胶乳颗粒的混合物，所述大直径聚苯乙烯胶乳颗粒平均粒径为400nm～600nm，所述小直径聚苯乙烯胶乳平均粒径为16nm～32nm，大直径聚苯乙烯胶乳颗粒:小直径聚苯乙烯胶乳颗粒＝(1-3):(7-9)。

作为进一步的优选，所述大直径聚苯乙烯胶乳颗粒和小直径聚苯乙烯胶乳颗粒上都交联有抗胱抑素C多克隆抗体。所述试剂R2中聚苯乙烯胶乳颗粒交联抗胱抑素C抗体的制备方法为化学交联法，具体为抗胱抑素C抗体序列中的氨基残基与活化后的聚苯乙烯胶乳颗粒表面羧基通过EDC进行化学交联。

作为进一步的优选，所述试剂R1的各组分及含量为：

缓冲液30～120mmol/L

无机盐80～300mmol/L

表面活性剂3～10mmol/L

防腐剂0.01％～1.0％

干扰消除蛋白0.5～1％

稳定剂1～10％。

以试剂R1的质量作为基础，百分比为质量百分比。

作为进一步的优选，所述试剂R2的各组分及含量为：

缓冲液30～120mmol/L

无机盐80～300mmol/L

表面活性剂3～10mmol/L

防腐剂0.01％～1.0％

稳定剂1～10％

聚苯乙烯胶乳颗粒混合物0.1-1％。

以试剂R2的质量作为基础，百分比为质量百分比。