[发明专利]提高猪伪狂犬病毒体外感染效率的细胞亲和剂及使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种细胞亲和剂，具体涉及一种提高猪伪狂犬病毒体外感染效率的细 胞亲和剂，并提供了该试剂的使用方法。

背景技术

猪伪狂犬病毒属于猪疱疹病毒属，在全世界广泛分布。目前，各个研究机构对经典 毒株和临床分离的猪伪狂犬病毒进行了体外细胞感染，并已研制出相关疫苗进入商品化销 售。

国内外有多篇文献报道指出，猪伪狂犬经典株与临床分离到的猪伪狂犬病毒可以 用多种细胞进行体外感染，如VERO细胞、ST细胞等，实验室病毒培养滴度一般在10⁷TCID₅₀， 但对于疫苗生产企业来讲，病毒的滴度越高，单位时间内生产病毒的效率就越高，生产成本 也就越低。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：对于疫苗生产企业而言，猪伪狂犬病毒的滴度较 低、生产成本较高；目的在于提供一种提高猪伪狂犬病毒体外感染效率的细胞亲和剂，大大 提高工业化生产猪伪狂犬病毒效率，为生产企业提高猪伪狂犬疫苗质量、降低生产成本提 供方法和依据。

本发明通过下述技术方案实现：

一种提高猪伪狂犬病毒体外感染效率的细胞亲和剂，包括复合酸与无机盐；所述 复合酸包括苹果酸、草酸、山梨酸和磷酸；所述无机盐包括磷酸氢二钠、氯化钾、氯化钠。

本发明通过优化复合酸与无机盐的组成物质的优选配合，有效改变猪伪狂犬病毒 与细胞间的微环境，增加病毒与细胞接触亲和度，从而增加病毒对细胞的感染率，进而有效 增加猪伪狂犬病毒的滴度，降低生产成本。

上述提高猪伪狂犬病毒体外感染效率的细胞亲和剂的使用方法，包括：

首先，将苹果酸、草酸、山梨酸、磷酸、磷酸氢二钠、氯化钾和氯化钠混合后制成细 胞亲和剂；

其次，将细胞亲和剂加入具有细胞的培养液中混合均匀后静置1～30min，该培养 液中细胞亲和剂的终浓度为0.01％～1％；

最后，将猪伪狂犬病毒加入到具有细胞亲和剂的培养液中，混合均匀后培育即可。

本发明通过优化细胞亲和剂的使用量，不仅仅能有效增加猪伪狂犬病毒的滴度， 而且还能有效减少培育时间，效果对比结果如表2所示，通过表2可知，细胞亲和剂的使用量 的优化使伪狂犬病毒的滴度增强10倍甚至以上，且培育时间至少要节省四分之一，效果更 加显著。

优选地，所述苹果酸为1～10份，草酸为1～12份，山梨酸为1～10份，磷酸为0.1～1 份；所述磷酸氢二钠为1～16份，氯化钾为6～60份，氯化钠为1～9份。

优选地，所述苹果酸为1～10份，草酸为1.2～12份，山梨酸为1～10份，磷酸为0.1 ～1份；所述磷酸氢二钠为5～7份，氯化钾为6～10份，氯化钠为3～8份。

通过采用上述优选组成和配比的细胞亲和剂，并将其使用到病毒生产后，不仅仅 使病毒滴度从原先的10^7.0TCID₅₀每毫升增加至10^9.2TCID₅₀每毫升，病毒滴度比原先提高近 100倍。

而且病毒感染细胞后，通常至少需要48h以上才能达到细胞病变脱落的目的，而加 入本发明优化组分和配比的细胞亲和剂后，仅仅只需要不到36h即可使细胞病变脱落，细胞 病变速度显著加快，节省培育时间。

本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：

1、本发明通过优化复合酸和无机盐的组成物质，有效改变猪伪狂犬病毒与细胞间 的微环境，增加病毒与细胞接触亲和度，从而增加病毒对细胞的感染率，进而有效增加猪伪 狂犬病毒的滴度，降低生产成本；

2、本发明通过采用上述组成和配比的细胞亲和剂，并将其使用到病毒生产后，不 仅仅使病毒滴度比原先不使用细胞亲和剂时提高近100倍，而且还能使细胞病变速度显著 加快，从原先的48h缩短到36h，显著节省培育时间。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例，对本发明作 进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本 发明的限定。

实施例

本发明中提高猪伪狂犬病毒体外感染效率的细胞亲和剂，具体组成成份如表1所 示。

表1