[发明专利]一种microRNA检测方法在审
| 申请号： | 201610169768.0 | 申请日： | 2016-03-23 |
| 公开（公告）号： | CN105648098A | 公开（公告）日： | 2016-06-08 |
| 发明（设计）人： | 吴滨 | 申请（专利权）人： | 吴滨 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 330001 江西*** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 microrna 检测 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种microRNA检测方法，其特征在于步骤如下：
（1）双聚合酶延伸尿嘧啶序列：将已知含量的microRNA与模板DNA混合，75℃退火杂交15min后慢慢冷却至室温，加入含聚合酶Klenow片段、脱氧尿嘧啶三磷酸核苷和末端脱氧核苷酸转移酶的缓冲溶液，在35°C水浴中反应4h，制成聚尿嘧啶碱基序列；
（2）合成荧光铜纳米簇：将抗坏血酸盐加入到步骤（1）的聚尿嘧啶碱基序列溶液中，再加入CuCl2，室温下反应10min，制成以聚尿嘧啶碱基序列为模板的红色荧光铜纳米簇，得到含红色荧光铜纳米簇的溶液；
（3）采用荧光分光光度计标定microRNA浓度与铜纳米簇红色荧光强度的标准关系曲线；
（4）将待测样品与模板DNA混合，75℃退火杂交15min后慢慢冷却至室温，加入含聚合酶Klenow片段、脱氧尿嘧啶三磷酸核苷和末端脱氧核苷酸转移酶的缓冲溶液，在35°C水浴中反应4h，制成聚尿嘧啶碱基序列；
（5）将抗坏血酸钠加入到步骤（4）的聚尿嘧啶碱基序列溶液中，再加入CuCl2，室温下反应10min，制成以聚尿嘧啶碱基序列为模板的红色荧光铜纳米簇，得到含红色荧光铜纳米簇的溶液；采用荧光分光光度计测定含红色荧光铜纳米簇的溶液的红色荧光强度，所得红色荧光强度结果与标准关系曲线对比，计算得出microRNA浓度。
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