[发明专利]鹿血清的分离制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种鹿血清的生产工艺，尤其涉及一种鹿血清 的分离制备方法。

背景技术

目前细胞培养工艺与方法已广泛应用于医药、医疗、生物 工程、基因工程、疫苗生产等领域，其中细胞培养液在生物技 术产品的生产和研究中成为无可替代的生物材料。当前国内市 场上所流通的细胞培养液，主要为含小牛血清或胎牛血清的细 胞培养液，以及一些无血清的细胞培养液。其中所使用的牛血 清绝大部分来自澳大利亚、新西兰等国，而国内的牛血清来源 主要集中在市场底端，原料大多来自于屠宰牛血。

近几年世界上发生疯牛病事件后，从根源上对细胞培养液 产业形成了结构性的影响和冲击，尤其是如果在细胞培养液中 检出疯牛病毒会产生极其严重的后果。当前市场上在医药、医 疗、生物材料，基因工程、疫苗生产等领域，所使用的以牛源 血清为基础的各种细胞培养基面对疯牛血可能会发生流行的 风险是客观的，因此需要更安全的细胞培养液来替代牛源血清 细胞培养液。但由于用于珍贵细胞培养的血清培养基大多从国 外进口，价格比较昂贵，给使用单位造成较大的成本负担。因 此在上述背景情况下，如何提供一种直接取代小牛血清、胎牛 血清的动物血清成为当前细胞培养液技术领域的一大重要课 题。

发明内容

为了克服上述现有技术中出现的问题，本发明提供了一种 鹿血清的分离制备方法，该制备方法简便快捷，工艺稳定且适 于大批量生产，且所得鹿血清能够用于含血清细胞培养液的制 备。

本发明为了解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种鹿血清的分离制备方法，包括下述步骤：

(1)采血：将待采血鹿采用消毒液进行鹿体全身清洁消 毒处理后，无菌采血法采取鹿全血至离心瓶内，将离心瓶置于 4～5℃下恒温静置5～6h；

(2)分离：将经(1)处理后的鹿全血在4～5℃的条件下， 采用2000～3000rpm的转速离心40～50min，离心结束后在真空 环境下从离心瓶中抽取血清，将该抽取所得的血清置于 -25～-30℃下保存备用，得到冷冻的血清；

(3)去除纤维蛋白：将经(2)处理所得的冷冻血清置于 4～5℃环境中融化，将融化后所得血清通过多层无菌纱布过滤， 收集滤液；

(4)灭活：将经(3)处理所得滤液置于56～60℃下恒温 水浴30～40min，水浴过程中随时晃动滤液；

(5)降低IgG浓度和葡萄糖含量：将经(4)处理后的滤 液采用层析法将IgG浓度降低至小于5μg/ml；然后采用能够 透析蛋白分子量为12000～14000的透析膜于0.15～0.18mol/L 的NaCl水溶液中透析至葡萄糖含量小于0.5mg/ml；

(6)去除病毒和支原体及除菌过滤：将经(5)处理后的 血清采用剂量为30～45KGy的γ射线照射；然后将上述血清装 入连续流血浆灭菌器内，并用紫外线以45～50°照射该装有血 清的连续流血浆灭菌器，照射同时将血清通过EK级无石棉蔡 氏滤片得到滤液，然后再将该滤液通过0.22～0.25μm过滤膜过 滤，最后经100～150nm过滤膜过滤，得到鹿血清。

其进一步的技术方案是：

步骤(1)中待采血鹿为身体状况健康、精神状态良好、 无疫情史的成年鹿、小鹿和胎鹿中的一种。

步骤(1)中采用2wt.％碘酒和75vol.％酒精作为消毒液依 次对待采血鹿进行鹿体全身清洁消毒。

步骤(3)中采用八层无菌纱布对融化所得血清进行过滤。

步骤(4)中将滤液置于56℃下恒温水浴30min。

步骤(6)中所述连续流血浆灭菌器的流速为 250-270mL/min。

本发明还公开了一种上述分离制备方法制备所得的鹿血 清。

本发明还公开了由上述制备方法制备所得的鹿血清在含 血清细胞培养基中的应用。

本发明的有益技术效果是：本发明所述制备方法简便快 捷，工艺稳定且适于大批量生产，且所得鹿血清不含纤维蛋白， IgG浓度和葡萄糖含量低，能够彻底杜绝病毒、病菌和支原体 的污染，制备所得的鹿血清能够用于含血清细胞培养液的制 备。

具体实施方式