[发明专利]一种水线草中耳草酮A的提取分离方法

权利要求书

1.一种水线草中耳草酮A的提取分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将水线草粉碎至60-80目，加入5-15倍重量的70％甲醇，搅匀，先超声提取0.5-1h，然后回流提取1-3h，提取温度为60-80℃；过滤；滤渣按上述方法再次进行超声提取、回流提取；共提取三次，合并滤液，减压浓缩，得到水线草醇提物；

2)将所得水线草醇提物分别用石油醚、正丁醇、乙酸乙酯反复多次萃取；取乙酸乙酯萃取部位，浓缩得精提浸膏；

所述石油醚萃取为将步骤1)所得水线草醇提物用石油醚萃取3-5次，所述水线草醇提物与石油醚的重量比例为1-3∶4-6；萃取后保留水部位；

所述正丁醇萃取为将所述水部位用正丁醇萃取3-5次，所述水部位与正丁醇的重量比例为1-3∶4-6；萃取后保留正丁醇萃取部位；

所述乙酸乙酯萃取为将所述正丁醇萃取部位用乙酸乙酯萃取3-5次，所述正丁醇萃取部位与乙酸乙酯的重量比例为1-3∶4-6；萃取后保留乙酸乙酯萃取部位；

3)将所述精提浸膏用3-5倍重量的甲醇超声溶解，过滤，滤液硅胶拌样后经100-200目正相硅胶柱层析，用洗脱剂进行梯度洗脱，收集洗脱液；

具体地，所述梯度洗脱包括以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂，分别以石油醚-乙酸乙酯体积比为7:1，5:1，2:1进行第一次梯度洗脱，收集石油醚-乙酸乙酯为5:1的洗脱液；再以石油醚-二氯甲烷为洗脱剂，分别以石油醚-二氯甲烷体积比为2:1，1:1，1:2进行第二次梯度洗脱，收集石油醚-二氯甲烷1:1的洗脱液；

4)将步骤3)所得第二次梯度洗脱液采用柱层析分离法或制备液相分离法或刮板法进一步纯化，制得耳草酮A；

所述柱层析分离法包括将步骤3)所得洗脱液采用葡聚糖凝胶柱层析，以甲醇作为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，制得耳草酮A；

或者所述柱层析分离法包括将步骤3)所得洗脱液经ODS反相柱层析，以甲醇作为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，制得耳草酮A；

所述制备液相分离法包括将步骤3)所得洗脱液经0.22μm微孔滤膜过滤，取滤液进制备液相，以65％甲醇水为洗脱剂等度洗脱，制得耳草酮A；所述制备液相使用LC-3000高效液相Thermo C18(250×21.2mm)制备柱；

所述刮板法包括将步骤3)第二次梯度洗脱所得石油醚-二氯甲烷为1:1的洗脱液浓缩，通过在薄层硅胶板上点样，进行洗脱定量，以正己烷:乙酸乙酯＝2:1为展开剂展开，置紫外光灯下检视定位后，将在硬板薄层板上样品区带的吸附剂定量刮下，用溶剂进行洗脱、定量，制得化合物耳草酮。