[发明专利]一种检测致病性犬钩端螺旋体的荧光PCR引物、探针及试剂盒

权利要求书

1.一种检测致病性犬钩端螺旋体的PCR引物与探针，其特征在 于，所述引物如下：

上游引物：5’-CTTGGGATTCTTCTAATMCSGATA-3’；

下游引物：5’-GATCCTTGTATTCCACCGATG-3’；

所述探针为：

5'-FAM-AGCCACGGRTTAGCTTCCACACTCA-BHQ1-3'。

2.权利要求1所述的引物与探针在制备检测致病性犬钩端螺旋 体的试剂盒方面的应用。

3.含有权利要求1所述引物与探针的试剂或试剂盒。

4.一种检测致病性犬钩端螺旋体的试剂盒，其特征在于，所述 试剂盒包括：权利要求1所述的PCR引物与探针、阳性对照、阴性对 照、Taq酶、dNTP、10×Buffer、ddH₂O。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照的 构建方法为：

1)以56608菌株的基因组DNA作为模板，利用权利要求1所述的 引物进行PCR扩增，对PCR产物进行纯化回收，与pMD18-T进行连接；

2)向Trans1-T1克隆感受态中加入步骤1)获得的连接产物，筛选 阳性克隆，提取质粒。

6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的工 作程序为：94℃3min；94℃20s，58℃50s，读板，35个循环。

7.根据权利要求4～6任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试 剂盒的工作体系为20μL：PremixExTaq10μL，上下游引物各 0.8μL，Probe0.6μL，模板1μL，ddH₂O补足。