[发明专利]玉竹高异黄酮的制备方法及其在医药中的应用

说明书

本发明提供一种用于制备玉竹高异黄酮的方法，所述方法包括以下步骤：1)对经粉碎的玉竹根茎进行超临界流体萃取脱脂，2)对脱脂产物进行热回流提取以得到玉竹总黄酮，以及3)对步骤2)中获得的玉竹总黄酮进行柱层析纯化，其中在所述热回流提取步骤中向所述脱脂产物加入乙醇和MnCl₂，并且在所述柱层析纯化步骤中使用甲基丙烯酸酯大孔树脂。本发明还提供根据本发明的方法制备的玉竹高异黄酮的用途。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体地涉及一种玉竹高异黄酮的制备方法及其在医药中的应用。

背景技术

玉竹是百合科黄精属多年生草本植物。分布较广，在国内很多省份均可生长，是我国出口创汇的主要中药材品种之一。玉竹主要作为滋补、保健品食用，是药食两用植物，已越来越受到人们的欢迎。玉竹性微寒、味甘，有养阴润燥、生津止渴的功效。玉竹的药用价值很高，在《神农本草经》、《本草纲目》等均有记载。迄今为止，从玉竹中分离鉴定了二氢高异黄酮(Wang Dongmei等Natural Product Research 2009 23(6)580)、甾体皂苷(林厚文等，药学学报1994 29(3)215)、二肽(秦海林等，中国中药杂志2004 29(1)42)等类型化合物。玉竹二氢高异黄酮类化合物有促进乳腺癌细胞凋亡(Rafi Mohamed M等Food Chemistry2007 104 332)和抗菌作用(Wang Dongmei等Natural Product Research 2009 23(6)580)。高异黄酮类化合物是化合物中特殊的一类，这类化合物在植物中较少见，主要分布于百合科植物中。从百合科玉竹中分离得到了多个该类化合物，活性评价显示所得的高异黄酮对多种肿瘤细胞增殖具有明显的抑制作用，同时具有很强的抗炎作用。

随着现代生活水平的提高，人们不仅关注疾病的治疗，更关注疾病的预防。具有提高免疫力、美容和抗衰老等功效的天然提取物得到人们普遍的非常关注。玉竹富含甾体皂苷、粘液质、黄酮、生物碱、多糖、多醇、糅质和强心苷等成分，其中玉竹高异黄酮是一种重要的新型功能成分。玉竹高异黄酮添加到食品和饮料中，可以得到健康食品和保健饮料；玉竹高异黄酮与酞丁安、醋酸氯已定配伍，可以得到抗菌、防病毒的皮肤保护洗液；玉竹高异黄酮加入片剂中，可以得到具有免疫调节功能的药品。

发明内容

传统“回流提取+聚酰胺树脂分离”技术所得高异黄酮纯度低，得率也较低。本发明的发明人发现，在热回流提取步骤中加入MnCl₂(0.1％～5％w/v)进行提取，可以显著提高高异黄酮的回收率；同时，在柱层析步骤中使用甲基丙烯酸酯大孔树脂，可以显著提高高异黄酮的纯度。经过上述改进后，高异黄酮的回收率由原来的30～60％提高到70％以上，终产品中高异黄酮的含量由原来的～20％提高到60％。

本发明的目的在于提供一种玉竹高异黄酮的制备方法。包括如下步骤：

(1)选取玉竹根茎(例如，辽宁丹东产玉竹根茎)，粉碎后经不加改性剂的超临界流体萃取脱脂。于圆底烧瓶中加入脱脂所得药渣、乙醇及MnCl₂热回流，过滤除去残渣，合并滤液，浓缩得到玉竹总黄酮样品待用。

(2)树脂的预处理：取一定量甲基丙烯酸酯大孔吸附树脂，用乙醇浸泡，然后用乙醇洗涤，直到洗出液中加适量蒸馏水无白色浑浊现象，再用蒸馏水洗至无醇；然后依次用NaOH、HCl浸泡，分别用蒸馏水洗至中性，备用。

(3)取(1)中得到的玉竹总黄酮样品加水溶解，加于经步骤(2)预处理的甲基丙烯酸酯大孔吸附树脂柱上，用蒸馏水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，然后先用低浓度乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，再用高浓度乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，减压回收得玉竹高异黄酮提取物。

经测定，在热回流提取步骤中加入MnCl₂(0.1％～5％w/v)提取玉竹高异黄酮，回收率由原来的30～60％提高到70％以上；在柱层析步骤中使用甲基丙烯酸酯大孔树脂，终产品中高异黄酮的含量由原来的20％提高到60％。