[发明专利]一种髓过氧化物酶定量检测的化学发光免疫分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及心脑血管疾病检测领域，具体是一种髓过氧化物酶定量检测的化学发光免 疫分析方法。

背景技术

髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)又称过氧化物酶，是血红素辅基的血红素蛋白 酶，是血红素过氧化物酶超家族成员之一。，存在于髓系细胞(主要是中性粒细胞和单核 细胞)的嗜苯胺蓝颗粒中，是髓细胞的特异性标志，随着对MPO研究的深入，人们发现MPO 基因多态性导致个体对一些疾病易感性的差异，与人类多种疾病的发生、发展密切相关， 因此越来越受到国内外学者的重视。髓过氧化物酶(MPO)是检测冠状动脉疾病、急性冠脉 综合征(ACS)的重要检测标志物，MPO可独立预测健康人未来患心血管疾病的风险，权 威杂志新英格兰医学期刊在2003年报道了一项研究，通过检测604名胸痛患者的MPO浓 度水平，能预测30天至6个月内发生心血管事件的概率。

因此，准确的、定量的检测MPO是临床医学迫切的需求，然而市场上使用的检测试 剂盒为胶体金法、酶联免疫法不具备定量功能，其检测灵敏度、线性范围也无法满足MPO 作为预测心血管疾病的功能需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种髓过氧化物酶定量检测的化学发光免疫分析方法，以解决 上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种髓过氧化物酶定量检测的化学发光免疫分析方法，由酶标板、标准品、样本稀释 液、浓缩洗涤液、反应液和放光底物共同组成试剂盒进行检测，具体包括以下步骤：

(1)准备：自4℃冰箱取出试剂，室温平衡15分钟；浓缩洗涤液以1：20稀释成工 作液；

(2)加样定位：将样品及标准品分别加入酶标板，标准品各浓度各设一孔，另设一 孔作空白对照；

(3)加样：样品或标准品于相应孔分别加100ul，每孔再各加反应液100ul，在震荡 器上混匀一分钟，置37℃恒温反应60分钟；

(4)洗板：吸除板孔中的反应液，各孔加入工作液约200ul，静置15-25秒，除去其 中液体；如此共洗五次，最后一遍将吸除板中液体拍尽；

(5)加底物：开启化学发光检测仪及主控制计算机，设定测定模式与参数；将微孔 板置于化学发光检测仪测定室，用加样器加放光底物，每孔50ul，加放光底物时应避免产 生气泡；

(6)测定发光值：于加底物后的第10分钟测定各孔的发光值RLU；并将数据用化学 发光检测仪定量软件进行定量分析。

作为本发明进一步的方案：步骤(4)在吸除板孔中的反应液后，用洗板机洗板五次。

作为本发明再进一步的方案：步骤(5)中用内置加样器加放光底物。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明灵敏度高，宽的线性动力学范围， 光信号持续时间长，分析方法简便快速，结果稳定、误差小，安全性好及使用期长。

附图说明

图1为髓过氧化物酶定量检测的化学发光免疫分析方法的结构示意图。

图2为髓过氧化物酶定量检测的化学发光免疫分析方法中灵敏度对比图。

图3为髓过氧化物酶定量检测的化学发光免疫分析方法中线性范围对比图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地 描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本 发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实 施例，都属于本发明保护的范围。

请参阅图1，本发明实施例中，一种髓过氧化物酶定量检测的化学发光免疫分析方法， 由酶标板、标准品、样本稀释液、浓缩洗涤液、反应液和放光底物共同组成试剂盒进行检 测，具体包括以下步骤：

(1)准备：自4℃冰箱取出试剂，室温平衡15分钟；浓缩洗涤液以1：20稀释成工作液；

(2)加样定位：将样品及标准品分别加入酶标板，标准品各浓度各设一孔，另设一孔作 空白对照；

(3)加样：样品或标准品于相应孔分别加100ul，每孔再各加反应液100ul，在震荡器上 混匀一分钟，置37℃恒温反应60分钟；