[发明专利]一种鸭肝炎病毒多聚蛋白抗原密集区域DHAV-MAg基因重组蛋白及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种鸭肝炎病毒多聚蛋白抗原密集区域DHAV-MAg基因重组蛋白及多克隆抗体的制备方法和用途。

背景技术

由鸭肝炎病毒(DHV)引起的鸭病毒性肝炎(DVH)是危害养鸭业最严重的传染病之一，该病的发病群体主要是4周龄以内的雏鸭。临床症状主要表现为抽搐、角弓反张及其他神经症状，俗称“背脖病”，剖检可见肝脏肿大，表面出血点大小不等。该病一旦爆发，死亡率极高，给全球的养鸭业带来严重的经济损失。引起DVH的病毒至少有3种，但目前爆发流行的是1型鸭甲肝病毒(DHAV-1)，对应以往的血清I型鸭肝炎病毒(DHV-1)。

DHAV属于小RNA病毒科禽肝病毒属，病毒粒子呈球形或类球形，直径20～40nm。该类病毒衣壳呈二十面体对称，包含32个壳粒，没有囊膜和突起，增殖速度快，繁殖能力强，复制一代约2h。DHAV-1是单链RNA病毒，基因组RNA长度7kb～8kb，分子量为8.6×10⁶Da，其具有较强的感染性。DHAV-1生存能力极强，它能够抵御外界环境的影响。在不同的条件下，该病毒的生存能力不同。如自然环境下，DHAV-1能够长时间的存活并且繁殖，阴凉环境如湿粪中可以生存37d以上，0～4℃下可存活2年以上，而-20℃下可存活长达9年。DHAV-1能够耐受强酸，对氯仿、甲醇、乙醚等有机溶剂均不敏感，并且对常见的消毒剂如甲醛、福尔马林等也有明显的抵抗力，对热也有一定的耐受作用。DHAV-1不凝集任何动物的红细胞，也不吸附任何红细胞。由于DHAV-1的研究开始较晚，而小RNA病毒科的病毒成员具有相似的基因复制、功能机制，所以，了解其他小RNA病毒的结构、基因功能等分子生物学特性，可为DHAV-1分子结构和生物学方面的研究提供更好的思路和创新。

小RNA病毒是RNA病毒中最小的一类，分布极为广泛，可归为肠道病毒属(enterovirus)、口疮病毒属(Aphthovirus)、心病毒属(Cardiovirus)、嗜肝病毒属(Hepatovirus)、副肠孤病毒属(Parechovirus)、马鼻病毒属(Erbovirus)、嵴病毒属(Kobuvirus)、捷申病毒属(Teschovirus)、禽肝炎病毒属(Avihepatovirus)等。小RNA病毒呈圆形，病毒粒子直径为20～40nm，无囊膜，为单股正链RNA病毒,基因组长度在7000～8500nt左右,不同属成员的基因组结构不尽相同。一般在基因组的5′非翻译区(5′UntranslationRegion,UTR)末端共价结合一短肽VPg,而3′非翻译区端含有polyA尾结构,病毒唯一的开放阅读款(OpenReadFrame,ORF)被镶嵌在这两个非翻译区之间。小RNA病毒的5′非翻译区较长(600～1200nt),其中含有丰富的复制和翻译控制元件,包括病毒的内部核糖体进入位点(IRES)可直接指导病毒蛋白的翻译过程和5′端与复制相关的的三叶草结构。当病毒ORF在宿主细胞中表达出单一的多聚蛋白后,随后被病毒自身编码的蛋白酶切割成为成熟的蛋白。在多聚蛋白N段1/3处都是编码病毒的结构蛋白(P1),组装成病毒的衣壳,剩下的2/3部分则是编码病毒的非结构蛋白(P2,P3)。P1片段大小约为90KD,翻译之后被病毒自身蛋白酶所切割为成熟的结构蛋白(VP1～VP4),进而组装成为病毒衣壳。衣壳蛋白的功能主要表现在：1、构成病毒形态的结构基础,保护病毒的核酸；2、其表面的茎环结构构成病毒的中和表位,与抗体相互作用；3、病毒粒子表面的凹槽形成的特定构象与细胞表面的受体相互作用,诱导病毒吸附细胞膜上,与病毒的感染范围相关。P2/P3主要参与对病毒复制所需的相关蛋白、宿主防御系统、宿主核糖体复合体等结构和功能进行调节,使病毒核酸和蛋白在宿主细胞内得到完满的复制和翻译。