[发明专利]一种表达载体有效
| 申请号： | 201510708368.8 | 申请日： | 2015-10-26 |
| 公开（公告）号： | CN105238816B | 公开（公告）日： | 2018-08-24 |
| 发明（设计）人： | 沈潇;林兴华 | 申请（专利权）人： | 广州汉腾生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10;C12P21/00 |
| 代理公司： | 北京市万慧达律师事务所 11111 | 代理人： | 谢敏楠;王虎 |
| 地址： | 510000 广东省广州市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 表达 载体 | ||
1.一种表达载体，其特征在于包含至少一个调控单元，所述调控单元含有：
a.Hr5增强子或其功能片段；
b.AcIE1启动子或其功能片段；和
c.Opie2启动子或其功能片段；
其中，Hr5增强子为AcMNPV中的同源区域5增强子，Hr5增强子功能性片段为SEQ NOID.6第1-482所示序列；
AcIE1启动子为AcMNPV中的立即早期1启动子，AcIE1功能片段为SEQ NO ID.7所示序列；
Opie2启动子OpMNPV中的立即早期2启动子，Opie2启动子功能片段为SEQ NO ID.6第614-1161所示序列。
2.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于所述hr5增强子、AcIE1启动子功能片段和Opie2启动子依次连接。
3.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于还含有异源编码序列，所述调控单元与异源编码序列直接连接，或者通过间插的DNA与异源编码序列分隔连接。
4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于所述载体还含有编码可选择标记的第二转录单元。
5.根据权利要求4所述的表达载体，其特征在于所述可选择标记为谷氨酰胺合成酶标记。
6.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于所述表达载体为昆虫细胞表达载体。
7.根据权利要求6所述的表达载体，其特征在于所述昆虫细胞为鳞翅目细胞。
8.根据权利要求7所述的表达载体，其特征在于所述细胞是来自Trichoplusia ni的BTI-TN-5B1-4细胞，或来自于Spodoptera frugiperda的Sf21或Sf9细胞。
9.一种宿主细胞，含有如权利要求1-8任一所述的表达载体。
10.根据权利要求9所述的宿主细胞，其特征在于所述细胞为鳞翅目细胞。
11.根据权利要求10所述的宿主细胞，其特征在于所述细胞是来自Trichoplusia ni的BTI-TN-5B1-4细胞，或来自于Spodoptera frugiperda的Sf21或Sf9细胞。
12.一种制备重组蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：
S1.用如权利要求1-8任一所述的表达载体转染昆虫宿主细胞；
S2.在合适条件下培养所述宿主细胞以使细胞生长和/或增殖并表达/产生该重组蛋白；和
S3.收获产生的重组蛋白。
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