[发明专利]检测转基因玉米CBH351的引物、试剂盒和方法

说明书

技术领域

本发明设计一种检测转基因抗虫玉米CBH351及内源基因Zein的双重荧光PCR检测试剂盒，本发明还涉及一种采用上述试剂盒检测转基因抗虫玉米CBH351及内源基因Zein的方法。

背景技术

玉米是世界上最重要的粮食作物之一，在世界农业生产中占有重要位置。农业转基因生物技术产业化的发展既是综合国力和竞争力的标志，又是国家科技竞争优势的重要标志。农业转基因生物的推广应用，降低了生产成本，减轻了环境污染，提高了产品价格竞争力。转基因作物使产量增加，农药使用量减少，形成了巨大经济和生态效益。国际上对转基因生物安全性的争论已经不是纯粹的科学技术问题，包含政治、经济、伦理等诸多方面。很多国家将他们研究的转基因物种拿到发展中国家中进行试验研究。在转基因产品的销售过程中，经营者与消费者之间缺乏公平，消费者经常是在不知情或者是被动的情况下就进行了消费。由此，我们需要对食品及饲料中转基因玉米的品系进行鉴定。为了加强对转基因玉米特别是进口转基因玉米的品系鉴定，根据欧盟转基因品系准入相关文献，建立食品和饲料中转基因玉米品系检测方法。CBH351Starlink ^TM玉米Z.mays是Aventis Crop Science即formerly AgrEvo公司运用现代生物技术手段开发的一种转基因玉米品系。其导入的来自苏云杆菌Bt基因可产生一种蛋白质Cry9C,具有杀虫活性,能够有效控制欧洲钻心螟虫。

针对玉米中Zein基因和CBH351基因，研究人员已开展了常规PCR和荧光PCR方法研究。目前，我国出入境检验检疫行业标准SN/T1196-2003《玉米种转基因成分定性PCR检测方法》中规定了对玉米MON810、Bt11、Evebt176、T14/T25、CBH351、GA21品系中转基因成分的定性检测。此外，农业部953号公告-2-2007《转基因植物及其产品成分检测抗虫玉米CBH351及其衍生品种定性PCR方法》标准规定了转基因抗虫玉米CBH351CBH351及其衍生品种的检测。这些基因的检测方法大都采用常规PCR方法和荧光PCR方法。

但常规PCR方法需要PCR扩增后进行电泳，不仅操作繁琐，而且容易引起污染，还需要使用可能致癌的荧光燃料。而探针法荧光PCR方法虽然灵敏准确，但TaqMan探针的线性结构导致了较高的背景荧光，如果荧光基团和淬灭基团的距离太近，在PCR扩增过程中,探针在它们之间降解的可能性将大为降低，从而起不到探针的作用。相反，如果荧光基团和淬灭基团分别置于探针两端，荧光背景信号加强，影响其检测的灵敏度。另外其合成成本较高，而且试剂有效期短，很容易降解，因而，不能在基层得到广泛的应用。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中的不足之处，提供一种用于检测转基因抗虫玉米CBH351及内源基因Zein的引物；

本发明的另一个目的是提供一种包括上述引物且组分和配比合理，使用方便，检测快捷，准确，适用于双重荧光PCR检测转基因抗虫玉米CBH351及内源基因Zein的试剂盒；

本发明另一个目的是提供一种采用上述试剂盒检测转基因抗虫玉米CBH351及内源基因Zein，该方法操作简便、快速，成本低，检测结果准确。

为了达到上述目的，本发明采用以下方案：

一种检测转基因抗虫玉米CBH351及内源基因Zein的引物，其特征在于该引物的序列分别为：

上游引物ZeinF：TTATGCTCCTTGGTCTTT

下游引物ZeinR：GTAATAGGGCTGATGATTG

上游引物CBH351F：TATGTTACTAGATCGCAGAT

下游引物CBH351R：AAGGTCCAATAGTGTATGT。

一种检测转基因抗虫玉米CBH351及内源基因Zein及内源基因Zein的试剂盒，其特征在于该试剂盒中20μL反应体系包括以下组分：

其中所述上游引物ZeinF的序列：TTATGCTCCTTGGTCTTT

所述下游引物ZeinR的序列：GTAATAGGGCTGATGATTG

所述上游引物CBH351F的序列：TATGTTACTAGATCGCAGAT

所述下游引物CBH351R的序列：AAGGTCCAATAGTGTATGT。

如上所述的一种检测转基因抗虫玉米CBH351及内源基因Zein的试剂盒，其特征在于该试剂盒中20μL反应体系包括以下组分：