[发明专利]检测转基因玉米CBH351的引物、试剂盒和方法

权利要求书

1.一种检测转基因玉米CBH351的引物，其特征在于该引物的序列分别为：

上游引物ZeinF：TTATGCTCCTTGGTCTTT

下游引物ZeinR：GTAATAGGGCTGATGATTG

上游引物CBH351F：TATGTTACTAGATCGCAGAT

下游引物CBH351R：AAGGTCCAATAGTGTATGT。

2.一种检测转基因玉米CBH351的试剂盒，其特征在于该试剂盒中20μL反应体系包括以下组分：

其中所述上游引物ZeinF的序列：TTATGCTCCTTGGTCTTT

所述下游引物ZeinR的序列：GTAATAGGGCTGATGATTG

所述上游引物CBH351F的序列：TATGTTACTAGATCGCAGAT

所述下游引物CBH351R的序列：AAGGTCCAATAGTGTATGT。

3.根据权利要求2所述的一种检测转基因玉米CBH351的试剂盒，其特征在于该试剂盒中20μL反应体系包括以下组分：

4.一种检测转基因玉米CBH351的方法，其特征在于包括以下步骤：

A、提取样品DNA；

B、利用如权利要求2或3所述的试剂盒对步骤A中的样品DNA进行PCR扩增；

C、扩增后对产物进行高分辨率熔解曲线分析，并结合扩增曲线判定结果。

5.根据权利要求4所述一种检测转基因玉米CBH351的方法，其特征在于步骤B中PCR扩增的反应程序按以下步骤进行：

(1)92℃～96℃预变性30s；

(2)92℃～95℃变性10s～30s，54℃～64℃退火10s～30s，72℃10s～30s，共进行35～45个循环；

(3)72℃延伸10s～30s。

6.根据权利要求5所述一种检测转基因玉米CBH351的方法，其特征在于步骤C中所述高分辨率熔解曲线分析，按以下步骤进行：

(1)92℃～96℃变性1min；

(2)40℃复性1min；

(3)然后初始熔解温度60℃～65℃，开始程序升温熔解至90℃～95℃，并在熔解过程中实时检测荧光信号，15～25次/秒。

7.根据权利要求6所述一种检测转基因玉米CBH351的方法，其特征在于步骤A中所述提取样品DNA的具体步骤如下：

称取1g样品，加入到50mL的离心管中；加入5mL CTAB提取液和20μL蛋白酶K溶液，充分混匀。65℃孵育30min，不时振荡；吸水性大的样品，加入CTAB提取液的量应根据液面是否能盖住样品并多出少许而定；65℃过夜后,8000r/min室温离心10min，取1ml上清液入2ml离心管中；加入700μL氯仿后用力振荡，13000g离心10min，转移上清液600μL到新的2ml离心管中；加入2倍体积的CTAB沉淀溶液颠倒数次后室温静置60min，13000×g离心10min，弃去上清，加入350μL NaCl溶液将沉淀进行悬浮，再加入350μL氯仿，涡旋振荡进行混匀，13000g离心10min，转移上清后加入0.8倍体积的异丙醇用来沉淀核酸，室温放置20min，13000g离心10min，弃去上清，加入500μL 70％乙醇溶液洗涤沉淀，溶解于50μL TE溶液中。