[发明专利]一种基于FRET探针熔解曲线法检测ALDH2基因多态性的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种基于FRET探针熔解曲线法检测ALDH2基因多态性的试剂盒，其特征在于：包括特异扩增基因ALDH2(rs671)位点的正向引物和反向引物，以及一对特异区分基因ALDH2(rs671)位点多态性的荧光标记探针；

引物、探针具体序列信息如下：

F：5’-AGCAGACCCTAAATCCCTGG-3’；

R：5’-CACCAGCAGACCCTCAAG-3’；

sensorprobe：5’-TGCAGGCATACACTGAAGTGAAAACTGT-FAM-3’；

anchorprobe：5’-ROX-AGTGTGGGACCTGCTGGGGGCT-P-3’。

2.根据权利要求1所述的基于FRET探针熔解曲线法检测ALDH2基因多态性的试剂盒，其特征在于：还包括扩增反应试剂PCRMix，其成分包含为：1×PCRBuffer，3mMMgCl2溶液，2.5mMdNTP溶液，1μΜF，1μMR，0.25μMsensorprobe，0.3μManchorprobe。

3.一种应用权利要求1所述基于FRET探针熔解曲线法检测ALDH2基因多态性的试剂盒的方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1：DNA提取；

S2：配置PCR反应液，包含n×19.6μLPCRMix和n×0.4μL酶液，其中酶液包含：5U/μlTaqHS；依次在95℃预变性10min；95℃变性10s，60℃退火60s，45个循环；得到扩增产物；

S3：在45℃～80℃，0.2℃采集一次荧光做熔解曲线分析；

S4：结果分析，阴性对照：1×TE。