[发明专利]一种岩藻黄醇的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种高纯岩藻黄醇的制备方法，属于食品加工技术及功能保健领域。

背景技术

岩藻黄质(fucoxanthin)亦称褐藻黄素，是自可食用褐藻中，如裙带菜(翅藻科，Undaria pinnatifida)，海带(Laminaria japonica Aresch)中提取出来的天然类胡萝卜素，在其刚性全反式长链的两端分别有一个化学性质活泼的5，6-环氧非饱和丙二烯键结构，因而又异于其他类胡萝卜素分子，具有很强的生物活性。近年来它的多种生物学活性已被证实，一些潜在的活性也正在被科学家们积极探求之中，目前己成为当今海洋药物研究与开发的主攻热点之一。

岩藻黄醇是岩藻黄质脱去一个乙酰基的代谢产物，其结构与岩藻黄质的结构类似，具有很强的生物活性，包括抗肿瘤、抗炎、抗氧化、减肥等多种生物活性。近年来研究表明，小鼠口服岩藻黄质后可将其转化为岩藻黄醇而得到利用。Hayato Maeda等研究也发现3T3-L1细胞系中的岩藻黄质代谢产物岩藻黄醇可以通过减少PPARγ(过氧化物酶体增殖激活受体)从而达到抑制3T3-L1前成脂肪细胞系到脂肪细胞系分化的目的，从而达到减肥的效果。有研究表明，岩藻黄醇的体外抗肿瘤活性甚至强于岩藻黄质。目前国内仅少数几个厂家提取制备低含量岩藻黄质原料(HPLC法，含量＜1％)，出口欧美、日本等国家，目前国内外尚未见到岩藻黄醇批量制备研究的报道，不能对岩藻黄醇以及岩藻黄醇系列产品进行高值化开发应用，因此，有必要发明一种高纯岩藻黄醇的制备方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以岩藻黄质为底物，通过酶解反应制备岩藻黄醇得到岩藻黄醇粗提物的方法，还提供一种将岩藻黄醇粗提物再进行分离纯化获得高纯样品的方法。

本发明一方面涉及一种岩藻黄质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)、以岩藻黄质高纯单体或者以岩藻黄质提取物为原料；

(2)、将原料与脂肪酶、催化剂混合，用PBS缓冲液溶解后在水浴上反应；

优选地，所述的催化剂为脂肪酶加速剂，优选去氧胆酸钠、牛磺胆酸钠、胆酸钠、甘氨胆酸钠、去氧牛磺胆酸钠、牛磺胆酸钠盐水合物、甘氨鹅去氧胆酸钠、鹅脱氧胆酸钠、牛磺鹅去氧胆酸钠等胆酸钠盐类物质。

优选地，所述的脂肪酶为：猪胰腺脂肪酶、牛胰腺脂肪酶、假丝酵母脂肪酶等脂肪酶。

优选地，步骤2)中所述的将原料与脂肪酶、催化剂混合中，原料：脂肪酶：催化剂的比例为1：1：1至1：40：40，可选自1:1:1，1:3:2，1:5:5，1:4:2，,2:5:3，5:4:4,1:2:2,1:3:3,2:10:5，1:10:10，1:20:20，1:40:40；

优选地，步骤2)中所述的PBS缓冲液的pH值为3-11，水浴的温度为20-70℃，反应时间为0-24h；pH值选自4、5、6、7、8、9、10、11；水浴温度选自20℃、30℃、37℃、40℃、50℃、60℃、70℃；反应时间选自0.5h、1h、2h、4h、8h、10h、12h、16h、20h、24h。

优选地，在步骤1)中采用原料为高纯岩藻黄质单体或岩藻黄质提取物，

纯度为1-99％。

优选地，所述岩藻黄质的制备方法，还包括3)，将步骤2)获得的反应液进行浓缩至干，用甲醇超声提取，提取液浓缩至干，获得岩藻黄醇粗提物。

本发明所述的岩藻黄醇的制备方法，可选择的包括步骤4)，将步骤3)获得的粗提物采用柱层析进行初步分离，收集岩藻黄醇馏分，浓缩获得岩藻黄醇粗原料。当步骤1)中所用的原料为岩藻黄质提取物时，优选包括本步骤。

优选地，步骤4)所述的柱层析为硅胶柱层析或大孔吸附树脂柱层析。

优选地，步骤4)所述的硅胶柱层析，硅胶粒度为100-400目，洗脱剂为二氯甲烷-甲醇(50：1-5：1)，或者石油醚-丙酮(20：1-3：1)，或者石油醚-乙酸乙酯(20：1-3：1)。优选分别用二氯甲烷-甲醇(50：1、25：1、10：1：5：1)进行洗脱，收集(25：1和10：1)洗脱部分；优选分别用石油醚-丙酮(20：1-3：1)进行洗脱，收集(25：1和10：1)洗脱部分；优选分别用石油醚-乙酸乙酯(20：1-3：1)进行洗脱，收集(25：1和10：1)洗脱部分。

优选地，步骤4)所述的大孔吸附柱层析，所用的填料为AB-8，D101等其中一种，洗脱剂为乙醇-水(1：99-99：1)。