[发明专利]牙鲆钙调蛋白和钙网蛋白的应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体的说是牙鲆钙调蛋白和钙网蛋白的应用。

背景技术

钙是机体各项生理活动不可缺少的离子,对于维持细胞膜生物电位、正常的神经传导和肌肉伸缩与舒张都具有重要作用。钙调蛋白(calmodulin,CaM)和钙网蛋白(Calreticulin,Crt)均是Ca²⁺结合蛋白，在钙代谢中扮演重要角色。CaM广泛存在于真核生物细胞中，可以调节细胞内Ca²⁺的浓度；在内质网中，CaM还可以被用作Ca²⁺的储存介质。CaM参与介导的生命活动有炎症反应、细胞凋亡、肌肉收缩、细胞内运动以及免疫反应等。Crt是内质网中能够结合Ca²⁺的蛋白，具有维持胞内Ca²⁺稳态的作用。Crt还可作为分子伴侣，帮助新合成的内质网蛋白正确折叠。另外，Crt还出现在细胞膜表面及细胞外环境中，参与细胞粘附、抗原呈递、基因表达调控以及细胞凋亡和抗肿瘤免疫应答等过程。目前鱼类钙调蛋白和钙网蛋白研究很少，其功能亦未知。

发明内容

本发明目的在于提供牙鲆钙调蛋白和钙网蛋白的应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

牙鲆钙调蛋白和钙网蛋白的应用，所述钙调蛋白或钙网蛋白用于制备抗细菌感染的制剂。

具体为：以牙鲆cDNA为模板，分别用引物F1/R1或F2/R2进行PCR扩增，扩增产物分别与载体pCN3连接，即获得钙调蛋白质粒pCNCam或钙网蛋白质粒pCNCrt；所述F1为5’-GATATCGCCACCATGGCTGATCAGCTTACAGAAGAGC-3’；R1为5’-GATATCCTTCGCTGTCATCATTTGTACGAACT-3’；F2为5’-CCCGGGGCCACCATGAAGGTCCTCGGCGTAGCAG-3’；R2为5’-CCCGGGAAGCTCATCTTTAAGTTTTGCTTCCTCCTC-3’。

所述表达钙调蛋白和钙网蛋白的质粒pCNCam或pCNCrt在制备增强鱼类抗细菌感染制剂中的应用。

本发明具有如下优点：本发明的钙调蛋白和钙网蛋白表达质粒注射牙鲆后能够显著提高鱼类的抗细菌能力。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。实施例旨在对本发明进行举例描述，而非以任何形式对本发明进行限制。

在本发明实施例中所涉及到的常规性实验方法均采用如下方法：

1.质粒提取、DNA(PCR)产物纯化、DNA片段从凝胶中回收皆使用“天根生化科技(北京)有限公司”的相应试剂盒。

2.大肠杆菌用Hanahan方法(Sambrook and Russell:Molecular Cloning:A Laboratory Mannual.Cold Spring Harbor Laboratory Press2001)。

3.所有限制性内切酶和连接酶皆购自于“纽英伦生物技术有限公司”，北京。

实施例1

钙调蛋白和钙网蛋白表达质粒pCNCam和pCNCrt的构建：