[发明专利]植物抗病性相关蛋白VrNPR1及其编码基因与应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地说，涉及一种植物抗病性相关蛋白VrNPR1及其编码基因与应用。

背景技术

绿豆(Vigna radiata(Linn.)Wilczek.)，属于豆科，在中国已有两千年的栽培史。是我国重要的粮食作物。因其具有重要的营养价值和医用价值，现已作为重要的功能型食品进行开发。近年来，随着种植业结构的调整和人们膳食结构的改变，人们对绿豆的需求量日益增加，种植面积逐年扩大。研究表明病虫害严重影响绿豆种子萌发和产量等方面。鉴于此，深入研究绿豆NPR1参与抗病的机理，对筛选出抗病较强的品种及抗病育种材料的筛选具有十分重要的意义。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种植物抗病性相关蛋白VrNPR1及其编码基因与应用。

为了实现本发明目的，本发明首先提供一种植物抗病性相关蛋白VrNPR1，来源于绿豆(Vigna radiata(Linn.)Wilczek.)，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，或该序列经替换和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

所述一个或几个氨基酸残基的替换和/或缺失和/或添加为不超过10个氨基酸残基的替换和/或缺失和/或添加。

本发明还提供了一种与植物抗病性相关的基因VrNPR1，所述基因可编码前述植物抗病性相关蛋白VrNPR1。

进一步地，所述基因含有如SEQ ID No.2中第7-1782bp所示的核苷酸序列。

更进一步地，当所述基因用于构建重组载体、工程菌、转基因细胞系或表达盒时，可根据本领域常规技术在其末端构建酶切位点。

在本发明的一个具体实施方式中，本发明提供一个5’末端的第1-6位核苷酸是SacI酶切位点，第1783-1788位核苷酸是SalI的酶切位点的核苷酸序列，该核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

本发明还提供了用于扩增前述基因的引物对，所述引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。

本发明还提供了含有前述基因的载体，所述载体为将前述基因插入载体pCAMBIA2300的SacI和SalI酶切位点之间得到的重组表达载体。

本发明还提供了含有前述基因的工程菌。

本发明还提供了前述基因在培育转基因植物提高抗病性中的应用。

进一步地，所述应用为利用前述重组表达载体或工程菌将所述与植物抗病性相关的基因VrNPR1导入目的植物得到抗病性提高的转基因植物。

其中，所述抗病性为抗白叶枯病。

所述植物为双子叶植物或单子叶植物，所述单子叶植物优选禾本科植物，具体可为稻属植物，更具体可为水稻品种“日本晴”。

本发明的有益效果在于：

本发明的实验证明，本发明从豆科植物绿豆中筛选到一个基因VrNPR1，通过农杆菌转化法将VrNPR1导入水稻，经过潮霉素初筛、分子检测、接种白叶枯菌检测抗病性等手段，筛选到抗病能力显著提高的转基因水稻株系。本发明对于培育抗病转基因豆科作物具有重要价值。

附图说明

图1为本发明所述载体pCAMBIA2300-VrNPR1构建流程图。

图2为本发明T₁代转基因水稻的PCR检测结果；

其中：M：1kb DNA ladder，由下到上分别为250bp，500bp，750bp，1000bp，1500bp，2000bp；16：阴性对照；17：阳性对照，pCAMBIA2300-VrNPR1载体；1、2、4-8，10和13-15：PCR鉴定阳性植株；3、9、115和12：PCR鉴定阴性植株。

图3为本发明T₁代转基因水稻和野生型水稻接种白叶枯菌菲律宾6号小种PXO99两周被接种叶片的照片。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

以下实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

以下实施例中的定量实验，均设置三次重复实验，结果取平均值。