[发明专利]肝癌相关的基因特异性siRNA、包含所述siRNA的双链寡RNA分子和包含它们的用于预防或治疗癌症的组合物

说明书

技术领域

本发明涉及肝癌相关的特异性siRNA和包含所述siRNA的高效双链寡RNA分子。所述双链寡RNA分子具有如下结构：其中亲水和疏水化合物通过简单的共价键或接头介导的共价键与双链寡RNA分子的两末端缀合，从而使其有效递送入细胞且可通过双链寡RNA分子的疏水相互作用在水溶液中转化成纳米颗粒。双链寡RNA分子中包含的siRNA可优选为肝癌相关基因，特别是Gankyrin或BMI-1特异性siRNA。

此外，本发明涉及制备双链寡RNA分子的方法，和用于预防和治疗癌症特别是肝癌的药物组合物，其包含双链寡RNA分子。

背景技术

抑制基因表达的技术是开发用于治疗疾病治疗剂和证实靶标中的重要工具。在这些技术中，自从发现了RNA干扰(下文称作‘RNAi’)的作用，发现RNAi可作用于多种哺乳动物细胞中的序列特异性mRNA(SilenceoftheTranscripts:RNAInterferenceinMedicine,J.Mol.Med.83:764-773,2005)。当长链双链RNA递送入细胞时，递送的双链RNA转换成小干扰RNA(下文称为‘siRNA’)，由称为Dicer的内切核酸酶加工成为21-23个碱基对(bp)，其中所述siRNA与RNA-诱导的沉默复合物(RISC)结合，然后引导(反义)链识别并降解靶mRNA，由此所述siRNA序列特异性地抑制靶基因的表达(Nucleic-AcidTherapeutics:BasicPrinciplesandRecentApplications,NatureReviewsDrugDiscovery1:503-514,2002)。

根据Bertrand等，发现siRNA在体内和体外与反义寡核苷酸(ASO)相比对相同的靶基因具有更优异的抑制mRNA表达的效果(ComparisonofAntisenseOligonucleotidesandsiRNAsinCellCultureandinVivo,Biochem.Biophys.Res.Commun.,296:1000-1004,2002)。此外，由于siRNA的作用机制是siRNA与靶mRNA互补结合以序列特异性地控制靶基因的表达，因此siRNA所应用的靶标与现有基于抗体的药物或小分子药物相比可显著扩大(ProgresstowardsinVivoUseofsiRNAs,MolecularTherapy13(4):664-670,2006)。

尽管siRNA具有优异效果和多种用途，为将siRNA开发为治疗剂，应将所述siRNA通过改进siRNA在体内的稳定性和细胞递送效率有效递送入靶细胞(HarnessinginvivosiRNAdeliveryfordrugdiscoveryandtherapeuticdevelopment,DrugDiscov.Today11(1-2):67-73,Jan.2006)。

为解决上述问题，已积极实施了对一些核苷酸或siRNA骨架修饰的技术的研究用于改进其体内稳定性从而对核酸酶具有抗性或使用载剂如病毒载体、脂质体、纳米颗粒等。

在使用病毒载体如腺病毒、逆转录病毒等的递送系统中，转染效率高但免疫原性和致癌性同样很高。另一方面，包括纳米颗粒的非病毒递送系统与病毒递送系统相比具有低的细胞递送效率但具有优势，其中非病毒递送系统在体内可具有高度的稳定性、可靶向特异性递送、通过将包含其中的RNAi寡核甘酸摄入或内化入细胞或组织改进递送效率等，且几乎不导致细胞毒性和免疫刺激，因而目前与病毒递送系统相比已将非病毒递送系统评估为潜在的递送系统(NonviralDeliveryofSyntheticsiRNAinvivo,J.Clin.Invest.,117(12):3623–3632,December3,2007)。

在非病毒递送系统中，在使用纳米载剂的方法中，纳米颗粒通过使用多种多聚物如脂质体、阳离子多聚复合物等形成，然后将iRNA支持于这些纳米颗粒上，即由此将纳米载剂递送入细胞。在使用纳米载剂的方法中，主要使用多聚纳米颗粒、多聚胶束、脂质复合物等。其中，脂质复合物由阳离子脂质组成且与细胞中内涵体的阴离子脂质相互作用以将内涵体去稳定化，由此发挥将iRNA递送入细胞的作用(Proc.Natl.Acad.Sci.15；93(21):11493-8,1996)。