[发明专利]一种S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶的活性检测方法及其应用有效
| 申请号： | 201410530672.3 | 申请日： | 2014-10-10 |
| 公开（公告）号： | CN104316682A | 公开（公告）日： | 2015-01-28 |
| 发明（设计）人： | 刘森;廖陈曾;王艳林;占景琼 | 申请（专利权）人： | 三峡大学 |
| 主分类号： | G01N33/573 | 分类号： | G01N33/573;G01N21/33 |
| 代理公司： | 宜昌市三峡专利事务所 42103 | 代理人： | 蒋悦 |
| 地址： | 443002*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 腺苷 甲硫氨酸 脱羧酶 活性 检测 方法 及其 应用 | ||
1.一种S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶的活性检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将二氧化碳测定试剂R1混合试剂、R2混合试剂在1.5mL的EP试管进行混合，再添加腺苷甲硫氨酸，最后添加S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)，得到总体积为1000ul的混合液，启动反应；
2)将上述混合液在37℃的水浴中孵育反应1-30min后，再将该混合液转至200uL/孔的透明96孔板，利用酶标仪等仪器检测体系在340nm波长处的光吸收，对该混合物的反应活性进行检测；
3)在步骤1)、2)的基础上同时检测不加S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)或不加腺苷甲硫氨酸的混合液的反应活性。
2.根据权利要求1所述的S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶的活性检测方法，其特征在于：所述的R1的混合试剂为5.5-10.5mmol/L的磷酸烯醇式丙酮酸及4.6-10.8mmol/L的氯化镁的混合溶液；R2的混合试剂为360-450U/L的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶，520-680U/L的苹果酸脱氢酶，0.35-0.55mmol/L的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的混合溶液，所述的腺苷甲硫氨酸的浓度为0.01-500mM；所述的S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)的浓度为0.1-100uM。
3.根据权利要求1所述的S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶的活性检测方法，其特征在于：所述的R1的混合试剂为7.0mmol/L的磷酸烯醇式丙酮酸及8.0mmol/L的氯化镁的混合溶液；R2的混合试剂为400U/L的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶，600U/L的苹果酸脱氢酶，0.45mmol/L的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的混合溶液；腺苷甲硫氨酸的浓度为1mM；S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)的浓度为1uM。
4.根据权利要求1所述的S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶的活性检测方法，其特征在于：R1混合试剂、R2混合试剂、腺苷甲硫氨酸、S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)的体积比为1：2.8-3.5：0.001-0.003：0.5-0.8。
5.根据权利要求1所述的S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶的活性检测方法，其特征在于：步骤1)中所述的反应是在空气条件下或者在N2保护条件下进行。
6.S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶的活性检测方法在筛选抑制S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶的抑制剂上的应用。
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