[发明专利]一种消除皮肤妊娠纹的干细胞提取物

说明书

本发明提供了一种用于消除皮肤妊娠纹的干细胞提取物，属于干细胞技术领域，该干细胞提取物来源于正常胎盘或脐带的干细胞，解决了从胚胎及脐带中获得干细胞及分离所需干细胞等技术问题。该干细胞提取物含有大量有益于皮肤再生修复的生物活性因子，利用本干细胞提取物或以本干细胞提取物为主要成分制成的产品，能够有效减轻甚至消除皮肤妊娠纹，且对皮肤无刺激等不良反应。

技术领域

本发明涉及干细胞技术领域，具体地涉及干细胞提取物的制备方法和用途。

背景技术

妊娠纹(stretch marks)是妇女妊娠期出现在腹壁、大腿内外侧、臀部、后腰、胸部等部位皮肤的一些宽窄不同、长短不一的粉红色或紫红色的波浪状花纹；分娩后，这些花纹的颜色会逐渐消失，留下白色或银白色的有光泽的瘢痕线纹。妊娠纹的形成主要是由于妊娠期激素的影响，加之腹部膨隆使皮肤的弹力纤维与胶原纤维损伤或断裂，皮肤变薄变细。妊娠纹在初产妇尤为明显，一旦出现多不会自然消失，并常伴随皮肤松弛，影响妇女产后的体态和身心健康。

目前，妊娠纹缺少有效的去除方法。市场上有采用激光、精油和内服药物的方法，多因效果不够显著或伴有明显副作用等原因，不为多数人接受。

胎盘是胎儿发育时期为胎儿的器官发育和成长提供多种营养物质的场所，也是胎儿最初的造血器官。胎盘具有活跃的合成生物活性物质的能力，支持胎儿的发育，包括多种激素(蛋白激素和甾体激素)和酶。近年研究显示，胎盘组织含有多种干细胞；另外，脐带的胶质中也蕴藏干细胞。

发明内容

本发明的目的是提供一种安全有效的消除妊娠纹的制剂及其制备方法。

本发明的制剂含有胎盘或脐带干细胞分泌的物质，称为干细胞提取物。发明人发现，该提取物本身，或与其它物质形成的组合物，能够显著减轻或消除妊娠纹。本提取物为正常(人)细胞所产生，对皮肤无刺激性。

本发明提供一种制备干细胞提取物的方法。本发明所用制备干细胞提取物的干细胞，分离自正常人的胎盘或脐带组织，经过体外培养扩增。该干细胞具有共同的特点：能够贴壁生长，细胞表面表达CD140a、CD105、CD73和CD29，不表达CD45。

本发明所用制备干细胞提取物的干细胞通过结合细胞贴壁特性和表面分子特征分离获得；或直接根据细胞表面分子特征分选获得。

结合细胞贴壁特性和表面分子特征的干细胞分离方法是，第一步根据细胞贴壁特性分离胎盘或脐带细胞。胎盘细胞贴壁分离，方法是将胎盘组织切成小块，用冷磷酸缓冲液(PBS)洗去游离的细胞，然后用0.25％胰蛋白酶/HBSS在37℃水浴中进行顺序消化两次，每次10分钟，收集两次的消化液，并用等量含10％人血清的DMEM中和、洗涤并接种在细胞培养皿中，24小时后换液去除悬浮细胞。以后每3天换液一次，7-10天可见干细胞集落，继续培养至培养皿中细胞70％饱和时胰蛋白酶消化收集细胞。

脐带细胞贴壁法分离：将正常人脐带用PBS反复冲洗，剥除血管和外膜，收集胶质(Wharton's jelly)，剪切成约1mm小块，种植在细胞培养皿上，用含10％人血清的DMEM在37℃和5％CO₂孵箱中培养，3-5天后小心换液，5-7天细胞从组织周边长出，用胰蛋白酶消化后收集细胞。

上述培养液中的DMEM可用IMDM或α-MEM替代。

第二步是根据细胞表面分子特征，分离胎盘和脐带干细胞：从上述方法获得的胎盘或脐带细胞中，分离CD140a阳性细胞。方法是先将培养的胎盘或脐带细胞用胰蛋白酶消化，形成单细胞悬液，用携带抗CD140a抗体的免疫磁珠(Miltenyibiotec)或流式细胞仪分选CD140a阳性细胞。