[发明专利]一种制备特立帕肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多肽类药物的制备方法，是一种具有可调节钙、磷代谢，促进骨形成而用于骨质疏松治疗的药物-特立帕肽的制备方法。

背景技术

特立帕肽，英名为：Teriparatide，为一直链34肽，结构式如下： 

肽序列为：

H-Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Met-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe-OH

特立帕肽Forteo (Teriparatide)是第一种获得美国食品及药物管理局FDA批准的骨形成剂类新药，用于原发性骨质疏松及性腺功能减退性骨质疏松、绝经后骨质疏松。特立帕肽[hPTH(1-34)]是一种合成的多肽激素，为人甲状旁腺素PTH的1-34氨基酸片段，该片段是含有84个氨基酸的内源性甲状旁腺素PTH具有生物活性的N-末端区域。本药的免疫学和生物学特性与内源性甲状旁腺素PTH以及牛甲状旁腺素PTH(bPTH)完全相同。本药刺激骨形成和骨吸收，可减少绝经后妇女骨折的发生率，根据给药方式的不同，还能提高或降低骨密度。连续输注可导致甲状旁腺素PTH浓度持续增高，因此比仅引起血清甲状旁腺素PTH浓度短暂增高的每日注射法产生的骨吸收作用更强。

关于特立帕肽制备方法，国内外已经有所报道。专利CN1198644涉及特立帕肽组合物，专利CN1281467涉及其结晶专利。 CN101134963、CN1706947、CN102304518等专利涉及特立帕肽的基因工程方法制备。中国专利CN102731643涉及特立帕肽的合成方法，其采用2-CTC树脂，通过片段法合成。CN103467595固相法合成特立帕肽，其应用了Ser的O-N酰基迁移反应。

通过基因工程法合成特立帕肽工作量大，三废严重。而纯粹的液相化学合成特立帕肽由于操作繁杂、合成周期长而暂时未见报道。固相合成特立帕肽具有其优势，操作简单、生产周期短。CN102731643通过片段法合成特立帕肽，总收率32%。

特立帕肽序列中存在Asn-Ser结构，因此合成过程可以采用假脯氨酸二肽结构片段进行。由于假脯氨酸二肽结构的存在，可以破坏β结构稳定性，减轻肽链间聚集的倾向，从而提高肽链的溶剂化程度，最终提高后续氨基酸的偶联效率。通过引入假脯氨酸二肽结构，使得本工艺合成特立帕肽总收率达到35%。

 Met易被氧化成Met(O)，因此，导致氧化杂质的生成，即：Met⁸(O)-特立帕肽。

Met8(O)-特立帕肽的结构如下： 

H-Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met(O)-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Met-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe-OH

该杂质的存在严重影响特立帕肽含量以及使用安全。因此需要找到有效的方法将其去除并使其达到优质标准级别0.1 %以下。本发明人研究发现，裂解试剂采用含NH₄I/Me₂S体系，可将合成过程中残基Met氧化副产物Met(O)还原为Met，提高了粗肽纯度，降低了HPLC纯化难度。经HPLC纯化后，杂质Met⁸(O)-特立帕肽含量降低到0.1 %以下。

本发明人对特立帕肽的制备方法进行了研究，提供了一种纯度高、成本低，适合规模化生产的特立帕肽制备工艺，此工艺既有效控制Met⁸(O)-特立帕肽含量又不影响特立帕肽的总收率。

发明内容

本发明人用现有的合成方法，制备特立帕肽，发现现有技术存在的技术问题是：合成纯度偏低、成本高，特别是杂质Met⁸(O)-特立帕肽含量较大，不适合规模化生产的问题。为此，本发明人对特立帕肽的合成方法进行了研究，从而得到了本发明的技术方案。