[发明专利]短瓣石竹的组织培养繁殖方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组织培养繁殖技术领域，尤其涉及一种短瓣石竹的组织培养繁殖方法。

背景技术

短瓣石竹，来源于石竹科短瓣石竹属植物短瓣（花Brachystemma calycinum D.Don），为石竹科单属种植物；其根或全草入药称土牛膝（壮）、抽筋草（瑶）等，味甘、淡，性平；有清热解毒、舒筋活络、祛风除湿、利尿消肿、接骨生肌的功效，用于风湿痹痛、跌打损伤、接骨、肾炎水肿、骨髓炎、疮疡疖肿、淋巴结结核等症。短瓣石竹分布于我国广西、四川、云南等省区，主产于桂西的隆林、田林、凌云、那坡、靖西、天峨、南丹、东兰等地。

短瓣石竹是一味常用传统壮瑶药材。在桂西的壮瑶地区，大多居民常用此药与猪筒骨同煲，给儿童强筋健体，给病后体虚的人调养身体；民间医生以此药为主药，治疗腰肌劳损、风湿性关节炎、手足痉挛、病后虚弱等症有奇效。鉴于其确切功效，广西伟健药业有限公司将其开发成独家中药品种“除瘀理筋散”，畅销港澳及东南亚地区；同时，伟健药业还根据民间煲汤的用法和粤港澳居民喜欢煲汤的习惯，拟将其开发成象鸡骨草、土茯苓、牛大力这样的汤料。随着其系列产品的不断开发，生产规模的不断扩大，原料需求从2007年的几百公斤增至5吨左右，使得其资源日渐紧缺，药材收购从本土田林县至周边的隆林、凌云等县再至邻省云南、贵州等地，现有野生资源已难以满足日益扩大的生产规模的需要。为加强对短瓣石竹的保护和开发利用，需大力推广短瓣石竹的栽培种植，要实现其人工栽培，首要解决的问题就是种苗的繁育。目前短瓣石竹的主要繁育方式为扦插及分株繁育，但这种繁殖方式很难实现短期内大量繁殖种苗，且经过多代分株后，植株体内毒素增多，影响植株的健壮成长；而采用生物技术组织培养技术，可以加速其繁殖速度获得大量试管苗，可满足种苗市场的需要。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种操作简便易行、培养周期短、繁殖快速成活率高的短瓣石竹的组织培养繁殖方法。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：短瓣石竹的组织培养繁殖方法，包括以下步骤：

（1）外植体的取材与消毒：取短瓣石竹剪切成2-3cm的带芽茎段作为外植体进行消毒；

（2）无菌试管苗的获取：将消毒好的外植体置于诱导培养基中进行不定芽诱导发芽得到无菌试管苗；

（3）试管苗繁殖培养：将无菌试管苗置于增殖培养基中进行培养获得大量不定芽；

（4）试管苗壮苗培养：将繁殖后的不定芽置于壮苗培养基中进行壮苗培养得到健壮植株；

（5）试管苗生根培养：将健壮植株置于生根培养基中培养得到完整的带根苗；

（6）试管苗炼苗移栽：筛选完整的带根苗进行炼苗后移植于基质中培养，再移栽至大田；

诱导培养基以MS为基本培养基，附加4.5g·L^-1琼脂，30g·L^-1蔗糖，培养基pH值为5.8，并添加1.0mg·L^-1的6-苄基腺嘌呤（6-BA）、0.1mg·L^-1的萘乙酸（NAA）；

增殖培养基以MS为基本培养基，附加4.5g·L^-1琼脂，30g·L^-1蔗糖，1g·L^-1活性炭，培养基pH值为5.8，并添加0.1-2.0mg·L^-1的6-苄基腺嘌呤（6-BA）、0.01-1.0mg·L^-1的萘乙酸（NAA）、0.1-0.5mg·L^-1的吲哚乙酸（IAA）；

壮苗培养基以MS为基本培养基，附加4.5g·L^-1琼脂，30g·L^-1蔗糖，1g·L^-1活性炭，培养基pH值为5.8，并添加0.1-1.5mg·L^-1的6-苄基腺嘌呤（6-BA）、0.1-2mg·L^-1的萘乙酸（NAA）；

生根培养基以1/2MS为基本培养基，附加4.5g·L^-1琼脂，30g·L^-1蔗糖，1g·L^-1活性炭，培养基pH值为5.8，并添加0.05-1.0mg·L^-1的吲哚丁酸（IBA）、0.5-2.0mg·L^-1的萘乙酸（NAA）。