[发明专利]短瓣石竹的组织培养繁殖方法

权利要求书

1.一种短瓣石竹的组织培养繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）外植体的取材与消毒：取短瓣石竹剪切成2-3cm的带芽茎段作为外植体进行消毒；

（2）无菌试管苗的获取：将消毒好的外植体置于诱导培养基中进行不定芽诱导发芽得到无菌试管苗；

（3）试管苗增殖培养：将无菌试管苗置于增殖培养基中进行培养获得大量不定芽；

（4）试管苗壮苗培养：将繁殖后的不定芽置于壮苗培养基中进行壮苗培养得到健壮植株；

（5）试管苗生根培养：将健壮植株置于生根培养基中培养得到完整的带根苗；

（6）试管苗炼苗移栽：筛选完整的带根苗进行炼苗后移植于基质中培养，再移栽至大田；所述诱导培养基以MS为基本培养基，附加4.5g·L^-1琼脂，30g·L^-1蔗糖，培养基pH值为5.8，并添加1.0mg·L^-1的6-苄基腺嘌呤、0.1mg·L^-1的萘乙酸；

所述增殖培养基以MS为基本培养基，附加4.5g·L^-1琼脂，30g·L^-1蔗糖，1g·L^-1活性炭，培养基pH值为5.8，并添加0.1-2.0mg·L^-1的6-苄基腺嘌呤、0.01-1.0mg·L^-1的萘乙酸、0.1-0.5mg·L^-1的吲哚乙酸；

所述壮苗培养基以MS为基本培养基，附加4.5g·L^-1琼脂，30g·L^-1蔗糖，1g·L^-1活性炭，培养基pH值为5.8，并添加0.1-1.5mg·L^-1的6-苄基腺嘌呤、0.1-2mg·L^-1的萘乙酸；

所述生根培养基以1/2MS为基本培养基，附加4.5g·L^-1琼脂，30g·L^-1蔗糖，1g·L^-1活性炭，培养基pH值为5.8，并添加0.05-1.0mg·L^-1的吲哚丁酸、0.5-2.0mg·L^-1的萘乙酸。

2.根据权利要求1所述的短瓣石竹的组织培养繁殖方法，其特征在于步骤（1）中的消毒按以下操作进行：首先将2-3滴洗洁精滴入装50ml自来水的烧杯中，把外植体放入烧杯轻轻搅拌2min，再用棉花清洗外植体表面污垢，自来水轻微流水冲洗8-10min；移置超净工作台，用75%乙醇浸泡30s，无菌水冲洗一遍，然后再用添加了1-2滴吐温-20的50ml浓度为0.1%升汞消毒6-8min、无菌水冲洗3-5次，最后放置消毒好的不锈钢碟子，剪切成1.0-1.5cm长的带芽茎段，获得无菌外植体。

3.根据权利要求1所述的短瓣石竹的组织培养繁殖方法，其特征在于步骤（2）至（5）的培养条件为：温度为23-25℃，光照强度1500-2000lux，光照时间为10-12h/d。

4.根据权利要求3所述的短瓣石竹的组织培养繁殖方法，其特征在于步骤（2）至（5）的培养时间分别为：15-20d、30d、30d、25d。

5.根据权利要求1所述的短瓣石竹的组织培养繁殖方法，其特征在于步骤（6）中的炼苗移栽按以下操作进行：经过步骤（5）获得带根的完整植株，待苗长至5-6cm,根长至2-4cm时，选择生长良好、整齐、健壮的瓶苗，在室温为23-25℃的室内进行炼苗，并在瓶中加入少量自来水淹没培养基，炼苗5-7d，用镊子取出试管苗，洗净根部培养基，移栽到基质中生长40-50d，再移栽至大田。

6.根据权利要求5所述的短瓣石竹的组织培养繁殖方法，其特征在于：所述基质为珍珠岩、砂石及泥沙按1:2:1的比例混合。

7.短瓣石竹组织培养的培养基，包括诱导培养基、繁殖培养基、壮苗培养基、生根培养基，其特征在于：

所述诱导培养基以MS为基本培养基，附加4.5g·L^-1琼脂，30g·L^-1蔗糖，培养基pH值为5.8，并添加1.0mg·L^-1的6-苄基腺嘌呤、0.1mg·L^-1的萘乙酸；

所述增殖培养基以MS为基本培养基，附加4.5g·L^-1琼脂，30g·L^-1蔗糖，1g·L^-1活性炭，培养基pH值为5.8，并添加0.1-2.0mg·L^-1的6-苄基腺嘌呤、0.01-1.0mg·L^-1的萘乙酸、0.1-0.5mg·L^-1的吲哚乙酸；

所述壮苗培养基以MS为基本培养基，附加4.5g·L^-1琼脂，30g·L^-1蔗糖，1g·L^-1活性炭，培养基pH值为5.8，并添加0.1-1.5mg·L^-1的6-苄基腺嘌呤、0.1-2mg·L^-1的萘乙酸；

所述生根培养基以1/2MS为基本培养基，附加4.5g·L^-1琼脂，30g·L^-1蔗糖，1g·L^-1活性炭，培养基pH值为5.8，并添加0.05-1.0mg·L^-1的吲哚丁酸、0.5-2.0mg·L^-1的萘乙酸。