[发明专利]包含至少一种烃基(硫代)糖苷的微生物检测介质

说明书

技术领域

本发明涉及通过生化手段、且更特别地通过酶促手段的微生物分析。更特别地，本发明涉及通过接种反应介质检测微生物(例如细菌菌株)，特别地用于表征(鉴定所述微生物、测定后者对至少一种抗微生物剂的潜在的抗性性质等)和/或枚举所述微生物的目的。这些反应介质包括生色底物和/或荧光底物，所述生色底物和/或荧光底物能够与对寻求的微生物是特异性的微生物酶反应。

现有技术

在本发明的框架内，无论在医疗环境还是工业环境中，最特别感兴趣的是：检测病原微生物或质量指标(特别地用于表征和/或枚举其的目的)；并且更特别地检测具有酯酶(特别地包括羧酸酯酶、脂肪酶和磷脂酶活性)、糖苷酶(osidase)、肽酶、硫酸酯酶或磷酸酯酶类型的酶活性的微生物，例如沙门氏菌(Salmonella)属、埃希氏杆菌(Escherichia)属、假单胞菌(Pseudomonas)属、李斯特菌(Listeria)属、葡萄球菌(Staphylococcus)属、肠球菌(Enterococcus)属、假丝酵母(Candida)属的细菌或酵母；并且更特别地，基于示出酯酶活性的存在/检测酯酶活性来检测沙门氏菌属的细菌。

大肠杆菌(Escherichia coli)菌株经常通过示出糖苷酶类型的酶活性(比如β-葡萄糖醛酸酶或β-半乳糖苷酶活性)的存在被揭示。

以相同的方式，李斯特菌属通过示出β-葡萄糖苷酶活性的存在被检测。

氨肽酶活性也可以被用于揭示微生物的群、属或种。例如，L-丙氨酸氨肽酶活性使得区分革兰氏阴性细菌与革兰氏阳性细菌成为可能。

沙门氏菌属是人类多种严重感染(伤寒热、食物中毒)的原因，其具备能够水解合成的生色底物例如靛原底物的非特异性酯酶。

沙门氏菌-且更通常地酯酶活性细菌-通常在培养肉汤中或在琼脂介质上被检测并且被表征，这使得酯酶活性细菌、特别地沙门氏菌的可疑菌落的检测和表征成为可能。此种介质的接种通过使生物学样品与介质接触来进行。

具有酯酶、糖苷酶、肽酶、硫酸酯酶或甚至磷酸酯酶活性的细菌在它们的酶资产(enzyme asset)上具备酯酶、糖苷酶、肽酶、硫酸酯酶或磷酸酯酶，这些酶将存在于介质中的合成酶底物的靶标键裂解，并且因此释放所述底物的活化的发色团或荧光团部分。这导致揭示水解、并且因此揭示靶标细菌或靶标细菌的菌落的存在的显色或荧光。

为了能够进行大规模的例行测试，有必要的是，检测和/或表征和/或枚举介质是稳定的并且通过限制操作实例使得可以在最大可能的程度上简化相应的检测和/或表征和/或枚举方法。此外，重要的是，方法提供非常良好的灵敏度(显色或荧光的强度)以及第一流的检测特异性(以便限制或甚至避免“假阳性”的检测)。可疑菌落的揭示率还是用于检测呈现上述酶活性的细菌的这些类型的介质以及方法的基本参数。

已知的是，酶比如酯酶、糖苷酶、肽酶、硫酸酯酶或磷酸酯酶的合成底物造成与用于微生物且特别地用于具备这些活性的细菌的培养介质之间的相容性问题。此外，随着时间推移此种底物是不稳定的，这导致随着储存时间增加，关注的酶活性的灵敏度减少。

关于这点，标题为“Synthèse de substrats indigogéniques.Mise en évidence de l'activitéestérasique des salmonelles”[Synthesis of indigogenic substrates.Showing the presence of the esterase activity of salmonellae]的科学论文：A.Agban等人,Eur.J.Med.Chem.(1990)25,697-699，公布了包含靛原底物即特别地溴-5-吲哚酚壬酸酯(C9)以及胆汁盐即脱氧胆酸钠的琼脂培养介质。此种培养介质经受与在下文中参考文献FR-A-2697028阐明的那些相同的缺点。