[发明专利]一种丙型肝炎病毒（HCV）高精确核酸定量检测试剂盒

权利要求书

1.一种丙型肝炎病毒（HCV）高精确核酸定量检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括磁珠法核酸提取试剂盒和HCV核酸扩增试剂盒，所述磁珠法核酸提取试剂盒包括裂解结合液、漂洗液A、漂洗液B、漂洗液C、洗脱液、磁珠液；所述HCV核酸扩增试剂盒包括RT-PCR反应液、酶混合液、HCV-内标、HCV定量参考品1-4、阴性质控品、临界阳性质控品、强阳性质控品。

2.如权利要求1所述的一种丙型肝炎病毒（HCV）高精确核酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述磁珠法核酸提取试剂中裂解结合液组成为十二烷基硫酸钠0.5-2.5%，Triton X-1000.5-2.0ml/100ml，异硫氰酸胍2mol/L-6.0mol/L，1-10mM EDTA（PH7.5）；所述漂洗液A组成为Triton X-1000.5-2.0ml/100ml，氯化锂0.5-1mol/L；所述漂洗液B组成为Triton X-1000.5-2.0ml/100ml，氯化钾0.1-0.3mol/L，60-80%乙醇；所述漂洗液C组成为Triton X-1000.5-2.0ml/100ml，氯化钠0.1-0.3mol/L，60-80%乙醇；所述洗脱液为10mmol/LTris.HCl（PH8.3），0.01-0.05%Prolin300；所述磁珠液为直径为1μm的氧化硅超顺纳米磁珠，浓度为10-40mg/ml。

3.如权利要求1所述的一种丙型肝炎病毒（HCV）高精确核酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述HCV核酸扩增试剂盒中RT-PCR反应液包括用于检测靶基因和内标的探针、用于扩增靶基因和内标的上游引物以及下游引物、RT-PCR缓冲液，HCV核酸扩增试剂盒中用于检测靶基因的探针序列为：5'-TACTGCCTGATAGGGTGCTTGCGAGTGCCC-'3（SEQ ID NO:1），5'端标记为FAM荧光发生基团，3'端标记为BHQ1荧光淬灭基团；用于扩增内标检测的探针序列为：5'-CAGAC TCCACATCGACCCTACCCGACTGC-'3（SEQ ID NO:2），5'端标记为HEX荧光发生基团，3'端标记为BHQ1荧光淬灭基团；用于扩增靶基因的上游引物序列为5'-ACTAGC CGAGTAGTGTTGGGTCG-'3（SEQ ID NO:3），下游序列为5'-AGTGTGCTCATGTTGCA CGGTC-'3（SEQ ID NO:4）；用于扩增内标的上游引物序列为5'-TTCGATCTCCGTCG AACCTTG-'3（SEQ ID NO:5），下游序列为5'-TTCTCAGGACTCCAGTCGCTG-'3（SEQ ID NO:6）。

4.如权利要求1或3所述的一种丙型肝炎病毒（HCV）高精确核酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述用于检测靶基因的使用探针浓度为5-20pmol，优选靶基因探针使用浓度为8pmol；用于检测内标的探针使用浓度为5-20pmol，优选内标探针使用浓度为8pmol；用于检测靶基因的上游引物以及下游引物使用浓度为10-30pmol，优选靶基因上游引物以及下游引物使用浓度为20pmol；用于检测内标的上游引物以及下游引物使用浓度为5-20pmol，优选内标上游引物以及下游引物使用浓度为8pmol。

5.如权利要求1或3所述的一种丙型肝炎病毒（HCV）高精确核酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述RT-PCR缓冲液组成为50mmol/L Tris-HCl（PH8.3），10mmol/L(NH4)₂SO₄，75mmol/LKCl，2.5mmol/LMgSO₄，0.15mmol/L dNTPs。

6.如权利要求1所述的一种丙型肝炎病毒（HCV）高精确核酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述酶混合液包括逆转录酶（M-MLV酶）、热启动Taq酶、尿嘧啶糖基化酶（UNG）、RNase抑制剂、T4噬菌体GP32蛋白；其中M-MLV酶用量为50-200U/人份，热启动Taq酶用量为3-8U/人份、尿嘧啶糖基化酶的用量为0.05-0.2U/人份、RNase抑制剂用量为5-10U/人份、T4噬菌体GP32蛋白用量为1-5μg/人份。