[发明专利]对亚型禽流感病毒进行检测过程中RNA样品的收集

说明书

技术领域

本发明涉及一种实验方法，具体来说是指对亚型禽流感病毒进行检测过程中RNA样品的收集。 

背景技术

禽流感病毒（AIV）属甲型流感病毒。流感病毒属于RNA病毒的正黏病毒科，分甲、乙、丙3个型。其中甲型流感病毒多发于禽类，一些亚型也可感染猪、马、海豹和鲸等各种哺乳动物及人类；乙型和丙型流感病毒则分别见于海豹和猪的感染。一般来说，禽流感病毒与人流感病毒存在受体特异性差异，禽流感病毒是不容易 感染给人的。个别造成人感染发病的禽流感病毒可能是发生了变异的病毒。变异的可能性一是两种以上的病毒进入同一细胞进行重组，如猪既可感染人流感病毒，又可能感染禽流感病毒，每种病毒都具有8个基因片段，从理论上讲，可以形成256个新的重组病毒；二是病毒基因位点由于某种因素的影响，1983年4月，美国宾夕法尼亚州曾暴发H5N2型病毒引起的鸡和火鸡低致病性禽流感，由于没有及时得到有效控制，到同年10月份，同样的H5N2型毒株突然由低致病性变成高致病性，造成禽类大量死亡。因此对于禽流感病毒的研究刻不容缓。 

发明内容

为克服上述技术问题，我们提出了以下技术方案： 

对亚型禽流感病毒进行检测过程中RNA样品的收集，首先对样品进行酶切鉴定，即在适宜的温水中进行消化，至少5小时，然后用百分之二点三的琼脂糖凝胶电泳进行测试，检验其结果；第二步是对其进行序列测定，即对于回收的阳性产物，以此作为模版继续拧PCR扩增，然后连接、转化，得到阳性克隆物，对其进行测序；去除PCR反应中的反应物，加入适量的酶混合物，二者重量比例为5：1；充分混合后烤箱中烘干；温浴；悬浮沉淀物；吸取沉淀物即可。

本发明中，在进行悬浮之前，可以进行低速离心，最多三分钟。 

本发明中，所述酶切鉴定和序列鉴定两个步骤之间，时间间隔不能超过12小时。     

本发明的有益效果是，可以有效避免蛋白氨基酸丢失，且稳定性好，表达量高，具有成本低，操作简单的优点。

具体实施方式

对亚型禽流感病毒进行检测过程中RNA样品的收集，首先对样品进行酶切鉴定，即在适宜的温水中进行消化，至少5小时，然后用百分之二点三的琼脂糖凝胶电泳进行测试，检验其结果；第二步是对其进行序列测定，即对于回收的阳性产物，以此作为模版继续拧PCR扩增，然后连接、转化，得到阳性克隆物，对其进行测序；去除PCR反应中的反应物，加入适量的酶混合物，二者重量比例为5：1；充分混合后烤箱中烘干；温浴；悬浮沉淀物；吸取沉淀物即可；在进行悬浮之前，可以进行低速离心，三分钟；所述酶切鉴定和序列鉴定两个步骤之间，时间间隔12小时。     

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。