[发明专利]检测花生过敏原用扩增内标、其构建方法及其应用

权利要求书

1.一种检测花生过敏原用扩增内标，其特征在于该扩增内标基因的序列为SEQ ID NO.1所示的碱基序列。

2.一种构建根据权利要求1所述的检测花生过敏原用扩增内标的方法，其特征在于该方法的具体步骤为：

a. 通过BLAST比对，选择与花生过敏原Ara h 1基因同源性较低的单增李斯特菌FSL R2-561基因（NC_017546）作为内参基因，根据内参基因的序列设计引物，选择扩增产物比目的片段大150bp ~ 250bp的引物FSL-F/R；所述的花生过敏原Ara h 1的基因为：

Ara h 1-F：CTGGAAACCTTGAACTCGT，

Ara h 1-R：GTTGATGGCTACTGGATGA；

所述的内参基因FSL R2-561的引物序列为：

FSL-F： TAGCCAACCGATGTTTCTGTATC，

FSL-R： CATCATTTAGCGTGACTTTCTTTCA；

b. 选取步骤a所得的内参基因的引物FSL-F/R的5’末端的8个碱基与花生过敏原引物Ara h 1-F/R的3’末端相连，得到27bp的长引物IAC-F/R，该长引物的序列为：

IAC-F：CTGGAAACCTTGAACTCGTTAGCCAAC，

IAC-R：GTTGATGGCTACTGGATGACATCATTT；

c. 以步骤a所得内参基因FSL R2-561基因为模板，以步骤a所得FSL-F/R为引物，进行PCR扩增，得到351bp的PCR产物；以该PCR产物为模板，步骤b所得长引物IAC-F/R为引物，进行PCR扩增，得到389bp的PCR产物即IAC片段；

d. 将步骤c所得IAC片段进行PCR扩增，将扩增产物进行割胶回收，连接到载体pMD18-T Simple Vector，转化大肠杆菌感受态细胞DH5α，提取质粒，即得到检测花生过敏原用扩增内标。

3.一种根据权利要求1所述的检测花生过敏原用扩增内标在检测花生过敏原中的应用。