[发明专利]水飞蓟宾经FXR途径发挥抗肝细胞凋亡作用机制

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物领域，具体涉及水飞蓟宾经FXR依赖途径发挥抗肝细胞凋亡的研究进展。

背景技术

水飞蓟用(Silybin，SB)来治疗肝胆疾病已有2000多年的历史，其主要的活性成分水飞蓟宾为黄酮木脂素类化合物，其化学结构见下：

水飞蓟宾可以防止化学毒素、食物毒素和药物等引起的肝损伤，通过进入细胞核内作用于RNA聚合酶，增加核糖体的形成，刺激蛋白合成，促进肝细胞的再生和修复，被称为“天然的保肝药”；可维持细胞膜流动性、保护肝细胞膜，提高肝和其他组织的GSH水平；并可作为抗氧化剂，清除机体内的自由基，减少体内ROS的生成。200880116206.3公开了水飞蓟宾组分在制备用于治疗病毒性肝炎、优选乙型肝炎或丙型肝炎、特别是用于减少病毒载量的药物中的应用；02156856.1公开了水飞蓟宾葡甲胺的制备方法及其在急性肝炎，慢性肝炎，初期肝硬化，脂肪肝，中毒性肝损害中的应用；200610097448.5一种高纯度的水飞蓟宾葡甲胺及其制备方法及其在制备治疗急性肝炎、慢性肝炎的急性发作期以及中毒性肝损害的药物中的应用。水飞蓟宾具有确切的肝保护作用，但其作用机制和靶标尚不明确。

FXR(Farnesoid X receptor，又称NR1H4)是一种核受体，在肝肠系统具有广泛的分布。鹅脱氧胆酸、胆酸及其代谢结合物是FXR的内源性配体，作为胆汁酸的传感器，FXR对于调节机体胆汁酸稳态具有重要意义。当前越来越多的研究表明，FXR对于多种肝损伤具有显著的保护作用：FXR缺失的小鼠会随着年龄的增加自发性形成肝脏肿瘤；另外FXR可通过拮抗NF-κB而对LPS等引起的肝脏炎症具有显著的保护作用，其外源性激动剂对非酒精性脂肪肝等多种肝损伤均具有显著的保护作用。因此FXR被认为是肝保护的重要靶标之一。而当前对于肝损伤的防治缺乏靶标明确的药物。因此，FXR对于指导新的肝保护药物的研发具有重要意义。

发明内容

本发明旨在阐明水飞蓟宾抗肝细胞凋亡的作用机制，即水飞蓟宾通过FXR依赖途径发挥抗肝细胞凋亡作用。PCR和WesternBlot实验结果证实，水飞蓟宾可以剂量依赖性的升高FXR的mRNA水平及蛋白水平。在肝细胞凋亡模型中，FXR表达下调，而水飞蓟宾可以显著恢复其表达水平。MTT及Hoechst染色结果显示，水飞蓟宾对ActD／TNFα引起的HepG2细胞凋亡具有显著的保护作用。用FXR SiRNA沉默HepG2细胞中的FXR基因后，水飞蓟宾对ActD／TNFα引起的HepG2细胞凋亡失去保护作用。

附图说明

图1：A水飞蓟宾可剂量依赖性的提高HepG2细胞中FXR的mRNA水平；B水飞蓟宾可以剂量依赖性的提高HepG2细胞中FXR的蛋白水平。＊p<0.05，＊＊p<0.01compared with Control group.

图2：水飞蓟宾对ActD／TNFα引起的HepG2细胞凋亡模型中下调的FXR蛋白表达具有显著逆转作用。

图3：水飞蓟宾对ActD／TNFα引起的HepG2细胞凋亡具有显著的保护作用。＊＊＊p<0.001compared with Control group；##p<0.01.###p<0.001compared with ActD／TNFαgroup.

图4：FXR基因沉默后使得水飞蓟宾丧失ActD／TNFα引起的HepG2细胞凋亡的保护作用。＊p<0.05,＊＊p<0.01compared with relative Control group；#p<0.05compared with relative ActD／TNFαgroup.

具体实施方式

实施例1.PCR实验

实验材料：