本发明涉及含有强启动子的用于链霉菌基因无痕编辑质粒,包括:强启动子Psco5768和密码子优化的毒素基因mazF,强启动子Psco5768控制密码子优化的毒素基因mazF的表达;强启动子Psco5768的序列包括SEQ ID NO:4所示的序列,密码子优化的毒素基因mazF的序列包括SEQ ID NO:3所示的序列。本发明构建的质粒选择了合适强度的启动子,并且可以用于链霉菌基因敲除、大片段敲除、定点突变、基因插入、大片段插入等多种编辑的高效无痕基因编辑质粒,为链霉菌来源的天然产物开发提供高效工具。