[发明专利]检测汞离子的间接竞争酶联免疫试剂盒及其制备方法

权利要求书

1. 一种检测汞离子的间接竞争酶联免疫试剂盒，包括盒体，其特征在于：盒体内设有用汞离子包被抗原包被过的酶标板、抗汞离子的单克隆抗体、酶标二抗、底物显色液、终止液、汞离子标准溶液、洗液浓缩液和样品处理液。

2. 根据权利要求1所述的间接竞争酶联免疫试剂盒，其特征在于：                                               所述酶标二抗为羊抗鼠酶标二抗GaMIgG-HRP或兔抗鼠酶标二抗RaMIgG-HRP，浓度均为100 ng/mL；所述底物显色液由显色剂A和显色剂B组成，显色剂A为过氧化脲，显色剂B为四甲基联苯胺；所述终止液为2 mol/L的硫酸溶液；所述汞离子标准溶液为汞离子溶解于0.01 mol/L、pH7.4的磷酸盐缓冲液得到的系列浓度溶液；所述洗液浓缩液为0.1 mol/L、pH7.4的磷酸盐缓冲液，其中含0.05%的Tween-20；所述样品处理液为0.1 mol/L的乙二胺四乙酸溶液；用于制备所述酶标板的固相材料为聚苯乙烯、聚乙烯或聚丙烯。

3. 根据权利要求1或2所述的间接竞争酶联免疫试剂盒，其特征是：所述的汞离子包被抗原是由以下方法制备的：

（1）称取20 mg 卵清蛋白溶于1 mL浓度为0.01 mol/L、pH值为9.0的HEPES缓冲液中，形成载体蛋白溶液；

（2）称取10mg 异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸鳌合剂溶于1mL 二甲基亚砜中形成金属螯合剂溶液；

（3）将0.5mL金属螯合剂溶液逐滴加到载体蛋白溶液中，混匀后加入100uL、1.5moL/L的三正丁胺，摇床室温反应24h，制成OVA-ITCBE溶液；

（4）取11.25mg硝酸汞溶于100uL蒸馏水中，形成均匀的Hg²⁺溶液；将Hg²⁺溶液加入到OVA-ITCBE溶液中，调节pH值至7.4，在室温下摇床孵育4h，然后移入透析袋中用PBS透析10d，即形成Hg²⁺-ITCBE-OVA包被抗原，收集分装，－20℃冻存。

4. 根据权利要求3所述的间接竞争酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述酶标板按如下方法包被：包被抗原为Hg²⁺-ITCBE-OVA，包被浓度为2 μg/mL，包被溶液为0.05 moL/L 的pH 为9.6的碳酸盐缓冲液，包被剂量为100 μL/孔，37 ℃温育2 h或室温8 h，用洗液浓缩液PBST洗涤3次，然后用5%的猪血清封闭，每孔250 μL，37 ℃温育1 h，再用PBST洗涤3次。