[发明专利]一种淀粉霉新菌株及其应用

说明书

技术领域

本发明属于堆肥领域，具体涉及一种堆肥用微生物及其应用。

背景技术

我国畜禽养殖业经过近30年的快速发展，极大的满足了城乡居民对于肉蛋奶的需求。然而我国畜禽养殖迅速发展的同时，不可避免带来每年超过20亿吨畜禽粪污的产生，同时有大量的畜禽粪便不能及时消纳，特别是快速兴起的养殖小区的出现，导致粪污大面积堆积或随意丢弃，不但使农业资源不能及时有效地利用，也已成为土壤、水体污染的主要污染源，并且将限制养殖业的可持续发展。2013年中共中央国务院一号文件再次重申了“强化农业生产过程环境监测，积极开展农业面源污染和畜禽养殖污染防治”工作；北京市十二五发展规划也将“研究废弃物无害化处理和资源利用技术与装备的系列化、标准化，提高生产能力”和“在调整高端农业产业布局的同时，高度关注农业发展对环境、能源和水资源的影响”列入工作重点。因此，在确保畜禽养殖产业有效发展、确保农民收入的前提下，有效地处置、利用畜禽废弃物、减少环境和生态的污染风险迫在眉睫。

目前好氧堆肥是实现畜禽粪便资源化利用的最主要手段。然而传统自然堆肥法由于堆肥初期有益微生物数量少，繁殖速度慢，因此发酵时间长、易产生臭味，堆肥效率低下。而在堆肥化过程中添加外源菌剂有利于畜禽粪便堆肥腐熟。但是当前市场上成熟的商品菌剂多为国外引进，价格昂贵，种类不多，应用范围宽泛。接种这些外源菌剂，在初期容易出现堆料中土著微生物与之激烈的竞争，导致外源菌剂无法在堆料中快速定殖，因此发挥的作用大打折扣。同时，由于已有的商品菌剂大多缺乏针对性，在北方低温季节接种后，堆料很难迅速升温，无法及时发挥应有的作用。目前我国北方地区在低温季节存在粪污无法及时的连续处理导致大量堆积、需要增加额外的粪污存储场地或设施、有机肥生产在低温季节无法正常运行等问题。因此筛选能在低温季节使堆料迅速升温的微生物菌株，对于解决北方地区粪污的连续处理和有机肥生产周年进行具有重要的实用价值。

发明内容

本发明首先提供淀粉霉（Amylomyces rouxii）新菌株CZ1。

本发明还提供含有所述淀粉霉CZ1的菌剂。

本发明的菌株分离与筛选过程如下：

①采用平板稀释法分别从新鲜牛粪、高温发酵阶段牛粪以及腐熟后的牛粪中进行微生物分离。称取各样品各10g分别放入装有90mL无菌水的三角瓶中，在摇床上振荡30min，使样品充分分散，静置20min后即为10^-1稀释液，然后连续稀释制成10^-2-10^-8浓度的稀释液备用。取100μL各浓度的稀释液，采用常规涂抹法用涂布器在改良高氏1号固体培养基上涂布，每个浓度梯度三个重复，分别置于25℃、35℃、50℃恒温培养箱中培养。3d后挑取平板上长出的单菌落，进一步纯化培养，并于4℃保存。

改良高氏1号培养基，其中葡萄糖10.0g/L、蛋白胨5.0g/L、KNO₃1.0g/L、K₂HPO₄0.5g/L、MgSO₄·7H₂O0.5g/L、NaCl0.5g/L、FeSO₄0.01g/L、水1000ml、pH7.2、琼脂1.5%-2.0%。

②根据菌株在纤维素—刚果红平板上形成透明圈的快慢、透明圈明晰程度、透明圈与菌落直径比值（D/d）的大小，筛选出了1株中温菌，该菌株在培养的第2天即出现清晰的透明圈，在培养第4天D/d达到10.7。该菌株菌落边缘不整齐绒毛长，草丛状，洁白色，毛上有黑色孢子。

③测定该菌株的ITS序列进行分子生物学鉴定，所用引物为ITS1：TCCGTAGGTGAACCTGCGG(SEQ ID No.2)；ITS4：TCCTCCGCTTATTGATATGC(SEQ ID No.3)，序列如SEQ ID No.1所示，与其它公布的淀粉霉的ITS序列同源性为99%以上，鉴定为淀粉霉（Amylomyces rouxii），命名为CZ1，并于2012年11月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.6874。

本发明的淀粉霉CZ1可制备成菌剂，其中，淀粉霉CZ1的活菌数可为50亿/克以上，优选为100亿/克以上。

本发明还提供所述生物菌剂的制备方法，其为在液体发酵培养基中发酵淀粉霉CZ1，将得到的发酵液即为生物菌剂。