[发明专利]一种检测雌激素硫酸转移酶活性的方法

权利要求书

1.一种检测雌激素硫酸转移酶SULT1E1活性的方法，利用同位素标记反应底物和/或硫供体，所述反应底物和硫供体在含有SULT1E1的待测样品的催化作用下发生硫化反应，通过对反应得到的硫化底物进行检测，计算出SULT1E1的活性。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的反应底物选自雌激素或甲状腺激素；所述雌激素为雌二醇、雌酮或雌三醇；所述甲状腺激素为甲状腺素、三碘甲腺原氨酸或四碘甲腺原氨酸。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述的硫供体为5'-磷酸磺基-3'-磷酸腺苷或5'-磷酸磺基-2'-磷酸腺苷。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于：所述的待测样品为血浆。

5.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于：所述的待测样品为组织提取物，所述的组织提取物为胎盘、卵巢、乳腺、子宫和/或血管内皮细胞组织标本。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于：用液体闪烁计数仪对硫化反应得到的硫化底物进行检测，根据同位素测试结果计算出待测样品中SULT1E1的活性。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：用[³H]标记-雌二醇（[³H]-E2）或[¹³¹I]标记三碘甲腺原氨酸/四碘甲腺原氨酸（[¹³¹I]-T3/T4）作为反应底物，用5'-磷酸磺基-3'-磷酸腺苷（PAPS）或5'-磷酸磺基-2'-磷酸腺苷作为硫供体提供硫酸基团，添加含有SULT1E1的待测样品，反应后产生的[³H]-17β雌二醇-3硫酸盐结合体（[³H]-E2-S）或[¹³¹I]-三碘甲腺原氨酸/四碘甲腺原氨酸的硫化物（[¹³¹I]-T3/T4-S）用液体闪烁计数仪进行检测，计算出待测样品中SULT1E1的活性，所述的待测样品为组织提取物或血浆，优选为血浆。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：用[³H]-E2或[¹³¹I]-T3/T4作为反应底物，添加含有内源性SULT1E1和PAPS的待测样品，反应后产生[³H]-E2-S或[¹³¹I]-T3/T4-S用液体闪烁计数仪进行检测，计算出待测样品的SULT1E1活性，所述的待测样品为组织提取物，优选为胎盘、卵巢、乳腺或子宫组织标本。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：用[³⁵S]标记的PAPS（[³⁵S]-PAPS）提供硫酸基团，用雌二醇或三碘甲腺原氨酸/四碘甲腺原氨酸作为反应底物，添加含有SULT1E1的待测样品，反应后产生[³⁵S]-17β雌二醇-硫酸盐结合体（[³⁵S]-E2-S）或[³⁵S]-三碘甲腺原氨酸/四碘甲腺原氨酸的硫化物（[³⁵S]-T3/T4-S）用液体闪烁计数仪进行检测，计算出中待测样品中SULT1E1的活性，所述的待测样品为组织提取物或血浆，优选为血浆。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：（1）待测样本处理：在非妊娠成年雌鼠和妊娠第15-18天的雌鼠，采血1毫升（抗凝），4℃离心（3500rpm）后取上清；用BCA法测量上清蛋白浓度；（2）反应体系（0.5毫升）：[³H]-E2（0.25～10nM）、血浆蛋白（100～1600微克）、PAPS（10～1000μM）、DTT8mM、Tris-Cl pH7.4，100mM、MgCl₂10mM；37℃反应45分钟，加入1.5毫升的冰三氯乙酸或冰甲醇停止反应，震荡混匀；加入1毫升二氯甲烷或氯仿抽提，4℃离心（12000rpm）后取上清0.2毫升；（3）用液体闪烁计数仪检测[³H]-E2-S，计算出待测样本中SULT1E1的活性。