[发明专利]余甘根苷B的制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及化学领域化合物的分离提取方法，具体涉及植物天然生理活性物质余甘根苷B的制备方法。 

背景技术：

余甘根苷B（phyllaemblicin B），为天然存在的具有复杂结构的高度氧化倍半萜类配糖体。该化合物最初从叶下珠属植物的中分离得到，但存在分离纯化过程繁琐，得率低等问题。因该化合物对柯萨奇病毒B3有显著抑制活性，可用于制备治疗病毒性心肌炎药物，本申请人曾申请相关专利并获得授权（专利号为：ZL200810058110.8），但该专利未涉及其制备方法。余甘根苷B为水溶性的倍半萜类配糖体，极性大，分离纯化困难，迄今没有工业化批量生产的制备工艺。 

发明内容：

本发明的目的旨在提供一种成本低、得率高、纯度高、制备过程简单易行、生产周期短，易于批量制备和工业化生产的余甘根苷B制备方法。 

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案： 

取任何一种含余甘根苷B的植物，烘干、粉碎，用含水乙醇加热回流提取2-3次，每次2-3小时，经过滤、浓缩、干燥得乙醇提取物，然后经大孔吸附树脂柱层析分离，在薄层层析的检测指导下，用不同浓度的含水甲醇梯度洗脱，收集含有余甘根苷B的洗脱液，浓缩，经正相硅胶柱柱层析纯化，用氯仿、甲醇与水的混合液进行洗脱， 再经葡聚糖凝胶柱层析和反相硅胶柱柱层析纯化，用低级醇与水的混合液进行洗脱，得余甘根苷B粗品，进一步用乙醇水重结晶，得余甘根苷B。 

上述技术方案中用于提取余甘根苷B的植物原料为：大戟科叶下珠属（Phyllanthus）植物的根及地上部分，如，余甘子（P.emblica）、泰国余甘子（P.acidus），渐尖叶下珠（Phyllanthus acuminatus）等；以及大戟科算盘子属(Acalypha)植物的根及地上部分，如，算盘子（Glochidion puberum）、红算盘子（Gl.coccineum(Buch-Ham.)Muell.Arg）、毛果算盘子（G.eriocarpum Champ.ex Benth）、革叶算盘子（Gl.daltonii(Muell.Arg.)Kurz），等。 

上述技术方案中用于柱层析分离的大孔吸附树脂为聚苯乙烯型大孔吸附树脂。可以是：如：MCI gel CHP-20P，DiaionHP20，DiaionHP20SS，D-101，KB-8等。提取物与大孔吸附树脂的重量比为1∶8-10，柱径高比为1∶6-8。 

上述技术方案中用于柱层析分离的正相硅胶为不同厂家生产的各种正相硅胶的产品型号与规格。例如：硅胶H（30-40m），硅胶G（200m）等。 

上述技术方案中用于柱层析分离的葡聚糖凝胶为不同厂家生产的各种葡聚糖凝胶的产品型号与规格。例如：Sephadex LH-20，Toyopearl HW-40F等。 

上述技术方案中用于柱层析分离的反相硅胶为不同厂家生产的各种反相硅胶的产品型号与规格。例如：Rp18，ODS等。 

上述技术方案中用于检测和指导柱层析分离的薄层层析法是7:3:0.5的氯仿:甲醇:水为展开剂，10％硫酸乙醇液为显色剂。 

上述技术方案中的重结晶步骤是将余甘根苷B粗品用少量低级醇（可以是甲醇或乙醇）充分溶解，加入适量水微微加热，室温下放置过夜，结晶。将析出的结晶用水反复洗涤，过滤，干燥，得到白色粉末，即为余甘根苷B的纯品。 

上述技术方案中余甘根苷B干燥方法可用加热干燥、冷冻干燥、喷雾干燥或微波干燥。 

经过上述制备工艺提取分离得到的余甘根苷B，得率高，产品的纯度大于98%，无有机溶剂的残留，可直接用作为制药的天然原料或作为标准对照品使用。 

本发明制备余甘根苷B的具体步骤如下： 

（1）植物原料去杂、洗净、烘干、粉碎成粗粉（过20-40目筛）。 

（2）将该植物粗粉用70%含水乙醇加热回流提取3次，每次提取时间为2小时，过滤、合并滤液，浓缩、回收溶剂，干燥，得乙醇提取物。 

（3）用少量水将乙醇提取物溶解，过滤，缓缓倾入大孔吸附树脂（如：DiaionHP20SS，D-101，KB-8等）层析柱的上端。层析柱的柱径高比为1:8-10，乙醇提取物与大孔吸附树脂的重量比为1:6-8。以不同浓度的乙醇梯度洗脱，同时用薄层层析法检测指导洗脱。薄层层析的条件为：氯仿-甲醇-水（7:3:0.5）为展开剂，10％的硫酸乙醇液为显色剂。收集含有余甘根苷B的洗脱液，合并，浓缩，回收溶剂，得乙醇洗脱物。