[发明专利]一种利用Hoechst33342对猪囊胚进行简易荧光计数的方法无效
申请号: | 201310344527.1 | 申请日: | 2013-08-09 |
公开(公告)号: | CN103397073A | 公开(公告)日: | 2013-11-20 |
发明(设计)人: | 刘帅;石德顺;刘庆友;崔奎青;李红丽;钟俊洁 | 申请(专利权)人: | 广西大学 |
主分类号: | C12Q1/06 | 分类号: | C12Q1/06 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 530004 广西壮族自治区南*** | 国省代码: | 广西;45 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 利用 hoechst33342 囊胚 进行 简易 荧光 计数 方法 | ||
1.一种利用Hoechst33342对猪囊胚进行简易荧光计数的方法,包括以下步骤:
(1)、先将猪囊胚于DPBS液中洗涤干净,后放于DT液中透化;
(2)、将步骤(1)中透化完成后的猪囊胚放于EH液中,在脱水固定后进行染色;其中EH液中Hoechst33342浓度为45μg/ml;
(3)、将步骤(2)中染色后的的猪囊胚置于甘油,用石蜡-凡士林封片,荧光观察并计数;
所述DT液是将99ml DPBS加入0.01g PVA混匀,加入1ml Triton X-100,摇床200rpm,30min,0.22μm滤器过滤所得;
EH液的制备过程为:先将1mg Hoechst33342加入1ml DPBS中,0.22μm滤器过滤后得到母液;然后将9.55ml无水乙醇加入450μL H母液,0.22μm滤器过滤得到EH液。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(1)中放于DT液中透化的时间为10s-5min。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(2)中透化完成后的猪囊胚放于EH液中,在4℃下脱水固定后染色过夜,其中脱水固定的时间为6h-12h;盛放EH液的容器封口、避光。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)的具体过程为:将经步骤(2)处理的猪囊胚置于甘油中;取出载玻片,吸取单个囊胚置于载玻片中间,每个囊胚带有10~20μl甘油;取盖玻片用石蜡-凡士林做柱封片。
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