[发明专利]一种利用Hoechst33342对猪囊胚进行简易荧光计数的方法无效

专利信息
申请号: 201310344527.1 申请日: 2013-08-09
公开(公告)号: CN103397073A 公开(公告)日: 2013-11-20
发明(设计)人: 刘帅;石德顺;刘庆友;崔奎青;李红丽;钟俊洁 申请(专利权)人: 广西大学
主分类号: C12Q1/06 分类号: C12Q1/06
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 530004 广西壮族自治区南*** 国省代码: 广西;45
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摘要:
搜索关键词: 一种 利用 hoechst33342 囊胚 进行 简易 荧光 计数 方法
【权利要求书】:

1.一种利用Hoechst33342对猪囊胚进行简易荧光计数的方法,包括以下步骤:

(1)、先将猪囊胚于DPBS液中洗涤干净,后放于DT液中透化;

(2)、将步骤(1)中透化完成后的猪囊胚放于EH液中,在脱水固定后进行染色;其中EH液中Hoechst33342浓度为45μg/ml;

(3)、将步骤(2)中染色后的的猪囊胚置于甘油,用石蜡-凡士林封片,荧光观察并计数;

所述DT液是将99ml DPBS加入0.01g PVA混匀,加入1ml Triton X-100,摇床200rpm,30min,0.22μm滤器过滤所得;

EH液的制备过程为:先将1mg Hoechst33342加入1ml DPBS中,0.22μm滤器过滤后得到母液;然后将9.55ml无水乙醇加入450μL H母液,0.22μm滤器过滤得到EH液。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(1)中放于DT液中透化的时间为10s-5min。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(2)中透化完成后的猪囊胚放于EH液中,在4℃下脱水固定后染色过夜,其中脱水固定的时间为6h-12h;盛放EH液的容器封口、避光。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)的具体过程为:将经步骤(2)处理的猪囊胚置于甘油中;取出载玻片,吸取单个囊胚置于载玻片中间,每个囊胚带有10~20μl甘油;取盖玻片用石蜡-凡士林做柱封片。

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