[发明专利]一个基于高分辨率溶解曲线鉴定梨果皮红/绿色泽的SNP 标记及其应用

权利要求书

1.一个基于高分辨率溶解曲线鉴定梨果皮红/绿色泽的SNP标记p2_he_5060，其特征在于该SNP标记的正向引物序列F1如SEQ ID NO.1所示，反向引物R1如SEQ ID NO.2所示。

2.权利要求1所述的SNP标记p2_he_5060在鉴定梨果皮红/绿色泽性状中的应用。

3.权利要求1所述的SNP标记p2_he_5060在梨分子育种中的应用。

4.权利要求1所述的SNP标记p2_he_5060的引物对，其特征在于该SNP标记的正向引物序列F1如SEQ ID NO.1所示，反向引物R1如SEQ ID NO.2所示。

5.权利要求4所述的SNP标记p2_he_5060的引物对在鉴定梨果皮红/绿色泽性状中的应用。

6.权利要求4所述的SNP标记p2_he_5060的引物对在梨分子育种中的应用。

7.一种基于高分辨率溶解曲线鉴定梨品种果皮红/绿色泽的方法，其特征在于采用SNP标记p2_he_5060的正向引物F1及反向引物R1对红皮和绿皮对照梨品种，以及待鉴定梨品种进行高分辨率溶解曲线分析，通过对待鉴定梨品种的高分辨率溶解曲线与红皮和绿皮对照梨品种的高分辨率溶解曲线的比较，鉴定该梨品种是红皮基因型还是绿皮基因型。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述的红皮对照梨品种为‘八月红’，所述的绿皮对照梨品种为‘砀山酥梨’。

9.梨果皮红/绿色泽性状鉴定的SNP分子标记的获得方法，其特征在于包含以下步骤：

a）以果皮为红色的‘八月红’×果皮为绿色的‘砀山酥梨’F1代果皮色泽表现分离的群体为试材，通过检测亲本及后代的SNP标记，利用Joinmap3.0作图软件构建SNP标记遗传图谱，在此基础上利用色泽性状表型数据的关联分析，将控制梨果皮红/绿色性状的主效位点定位到第5连锁群上；

b）在第5连锁群上选取与红色性状位点紧密连锁的1个SNP标记，利用primer5.0软件，设计1对SNP标记引物并进行验证；

c）利用设计的1对SNP标记引物对‘八月红’ב砀山酥梨’的94个杂种群体进行高分辨率溶解曲线分析，通过对梨果皮红/绿性状的表型测定结果与HRM的分型结果比较分析，获得可对梨果皮红/绿皮色泽性状进行良好分型的SNP标记p2_he_5060，其正向引物序列F1如SEQ ID NO.1所示，反向引物R1如SEQ ID NO.2所示，扩增片段大小为206bp，通过Kosambi函数计算出该标记与梨红/绿皮性状基因连锁距离为4.2cM；

d）利用SNP标记p2_he_5060的引物，对38个梨栽培品种进行高分辨率溶解曲线分析，其中包含12个红皮梨、26个绿皮梨；10个梨品种的红皮色泽性状得到了验证，鉴定的准确率为83.3%；24个梨品种的绿皮色泽性状得到了很好的验证，鉴定的准确率为92.3%，选取‘八月红’、‘砀山酥梨’、‘火把梨’和‘京白梨’4个梨品种进行测序分析，引物扩增序列中出现了4个单核苷酸的变化，其中3处发生颠换C-G，A-T，T-G，1处发生转换C-T，证明该标记可以作为梨果皮红/绿皮色泽性状基因的标记。