[发明专利]贻贝寡肽的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及制备一种具有延缓衰老活性的贻贝寡肽，可作为抗衰老食品、功能性食品或药品，属于海洋生物技术应用领域。 

背景技术

贻贝，俗称“海红”，其干制品名为“淡菜”，是我国大量人工养殖的贝类。贻贝富含蛋白质，素有“海中鸡蛋”的美称，粗蛋白含量高于其他海产双壳类软体动物，且氨基酸种类较齐全。已有技术利用碱提贻贝蛋白（专利号：201010513556.2），超声波-微波辅助加酶单一酶解制备贻贝酶解液，然后用二氧化氯溶液稀释，超微膜过滤纯化截留分子量为50000道尔顿多肽（专利号：201110127662.1），减法提取蛋白酶解并通过超滤富集活性肽具有抗氧化（专利号：201010234963.X）、抗癌（专利号：201010610946.1及201010296130.6）、降血压(专利号：201010284271.6及201010612353.9)及增强免疫（专利号：201110246647.9）功能，但至今尚未见有关贻贝多肽抗衰老活性的报道。 

发明内容

本发明以紫贻贝为原料，采用碱性冷提法从贻贝冻干粉中获得贻贝蛋白；通过复合酶解蛋白得到混合多肽，超滤获得寡肽，采用衰老小鼠模型进行一系列抗衰老动物实验及行为学实验，并通过果蝇生存实验，证明该贻贝寡肽具有延缓衰老的活性，为实现贻贝的科学化、高值化利用开创了新途径。与现有技术相比,本发明的优点在于：提取制备了贻贝蛋白，采用最佳的蛋白酶和优选的工艺对贻贝蛋白进行酶解纯化，避免了高温对贻贝蛋白分子结构的分解，并使贻贝多肽在分子量水平上得到分级，从而使所得的贻贝寡肽延缓衰老的效果更纯更好。 

本发明通过以下技术手段实现。贻贝寡肽的制备方法，按照下述步骤进行： 

（1）制备贻贝冻干粉： 

取紫贻贝的新鲜贻贝肉，连同汁液迅速冷冻干燥粉碎后得到贻贝粉； 

（2）制备贻贝蛋白： 

将适量的贻贝粉，用0.2mol/L的NaOH溶液配成质量分数为1%的悬浮液，并用2mol/L的NaOH溶液调节pH值梯度为10-12，搅拌浸提60min（4℃）；将浸提液于8000r/min条件下低温离心20min（4℃），收集上清液；将上述上清液，用2mol/L HCl调pH值为5-6，沉淀5-10分钟，8000r/min，，4℃离心20min；分别收集上清夜和沉淀，沉淀冷冻干燥为贻贝蛋白粉； 

（3）制备贻贝寡肽： 

以贻贝蛋白粉于水中配成质量分数为2%的悬浮液，置于反应器中52.5℃水浴浸泡30分钟后，加入中性蛋白酶与复合风味酶组合同时水解；加入蛋白酶量各为4000U/g底物蛋白，为pH6.0-7.0条件下，52.5℃水解2小时，煮沸10min灭酶。酶解液离心，取上清液分别采用10kDa、5kDa、3kDa、1kDa的超滤膜超滤；取小于1kDa滤液冷冻干燥，获得贻贝寡肽。 

中性蛋白酶与复合风味酶的质量比为1:2.5。 

贻贝寡肽的应用，可以用于制备抗氧化活性和延缓衰老作用的食品。 

本发明的有益效果：相比较已有的酶解产物或其他活性多肽，本发明提供的贻贝寡肽具有更强的抗氧化活性和更显著的延缓衰老作用，可用于制备抗衰老、提高认知能力的食品、功能性食品或药品。 

本发明原料来源丰富、制备简便、功效显著，为贻贝多肽的应用开辟一个新的领域，有利于促进海洋生物的开发利用。 

附图说明

图1：本发明的工艺流程图, 

图2：贻贝寡肽组、对照组和加速衰老组小鼠一般状态图, 

图3：水迷宫空间探索实验中各组小鼠在平台象限停留的时间, 

图4：水迷宫空间探索实验中各组小鼠穿过平台的次数, 

图5：旋转棒实验中各组小鼠在棒上的平衡时间。 

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明做进一步阐述： 

本发明中延缓衰老评价方法如下： 

以果蝇的生存试验评价贻贝寡肽可以延长平均寿命、最高寿命及提高性活力；并采用中年早衰小鼠模型，测定贻贝寡肽对小鼠脑、肝、肾组织抗氧化能力；通过测定小鼠行为、学习记忆能力以及脑衰老病变，测定贻贝寡肽对衰老小鼠认知能力的改善作用，从而全面评价贻贝寡肽具有延缓衰老的作用。图1为本发明的工艺流程图。 

实施例1：制备贻贝寡肽