[发明专利]一种细胞保存液、其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种细胞保存液、其制备方法和应用。

背景技术

干细胞（Stem Cell，SC）是存在于生命个体中的一类具有高度自我更新能力和多向分化潜能的细胞群体。它们不仅存在于胚胎发育时期而且在成体内也广泛分布于各种组织器官的特定部位，故宏观上将其分为胚胎干细胞和成体干细胞。随着细胞替代治疗的发展，干细胞移植治疗已成为临床上治疗某些疾病的重要手段。

免疫细胞治疗是一种新兴的、具有显著疗效的全新的抗肿瘤治疗方法，弥补了传统的手术、放疗和化疗副作用的弊端，已经被公认为二十一世纪肿瘤综合治疗模式中最活跃、最有发展前途的一种治疗手段，也是世界上目前唯一有希望完全消灭肿瘤细胞的治疗手段。目前在临床中采用的免疫细胞包括：细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）、树突状细胞（DC）、DC+CIK细胞、自然杀伤细胞（NK）和DC-T细胞等。

细胞治疗在临床上的应用前景已经得到了科学家的广泛认可，但是在实际应用中尚有诸多难题需要克服。目前，细胞治疗大多采用静脉滴注的方式进行。将体外培养好的细胞注射到不同规格的氯化钠注射液中，加入或不加入一定比例的人血白蛋白，将制备好的细胞悬液通过静脉滴注回输病患。所采用的细胞保存液为氯化钠注射液或者含有部分人血白蛋白。采用这种传统保存方法，细胞经过几个小时的保存后，细胞活率和生物学效力有很大程度的降低。常规保存方法不利于细胞较长时间的保存和远距离的运输。细胞在现实临床应用中，因为临床使用单位不具备相应的细胞培养技术和高标准专业化的细胞制备实验室，所以需要在区域性中心实验室进行细胞制备，制备好的细胞经过一定时间和距离的运输送到临床单位应用。细胞在回输前需要较长的运输保存时间，就要求在运输过程中采用合适的保存液来维持细胞的活率和生物学效力。而冻存的细胞可以采用-80℃干冰运输的方式进行远距离长时间运输。但是，冻存细胞的冻存液含有血清、培养基和DMSO。冻存的细胞再应用到临床之前需要进行复苏和洗涤，复苏会造成一定比例的细胞死亡，再次洗涤容易引起细胞污染。

在哺乳动物细胞的保存中，经常使用含有血清的保存液。血清一般来源于牛血清或者人AB血清。但在细胞治疗的临床应用中，制备细胞的方法要求是无血清培养，如果在保存液中使用血清，就会引入血清污染。同时血清中的成分不明，不仅含有细胞因子、生长因子、激素等成分，还可能含有未知病毒影响的问题。所以存在未知病毒污染和由于保存液成分不确定而引起的品质难以稳定等多种缺点。

因此，本领域亟需一种能够在较长时间内很好地维持细胞活率和生物学特性并且组分明确的细胞保存液。

发明内容

本发明的目的在于提供一种细胞保存液，其在2-10℃的温度范围内保存细胞，在24小时内很好地维持了细胞活率和生物学特性，避免了细胞复苏和再次洗涤的风险，也避免了现有保存方法引起的细胞死亡和生物学特性改变，极大地扩大了中心实验室细胞应用的地域覆盖范围。

为实现本发明的目的，本发明采用以下技术方案：

在第一方面，本发明提供一种细胞保存液，其以100毫升氯化钠注射液和/或复方氯化钠注射液计，其中含有维生素0.01～1克、白蛋白0.1～10克、糖类0.1～1克、三磷酸腺苷和/或三磷酸腺苷二钠0.001～0.1克。

本发明提供的细胞保存液中，所述白蛋白选自人白蛋白及哺乳动物白蛋白中的一种或多种，优选人及哺乳动物的血白蛋白、卵白蛋白和乳白蛋白中的一种或多种，更优选人、牛、马及羊的血白蛋白、卵白蛋白和乳白蛋白中的一种或多种，最优选人血白蛋白。

本发明提供的细胞保存液中，所述维生素选自维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素B4、维生素B6、维生素B9、维生素B12、维生素C、维生素D、维生素E、维生素K、维生素H、维生素P、维生素PP、维生素M、维生素T和维生素U中的一种或多种，优选维生素C。

本发明提供的细胞保存液中，所述糖类选自单糖、二糖、三糖和多糖中的一种或多种，优选葡萄糖、半乳糖、果糖、核糖和海藻糖中的一种或多种，更优选葡萄糖。