[发明专利]猪瘟兔化弱毒疫苗荧光定量RT-PCR检测试剂盒

权利要求书

1.一种猪瘟兔化弱毒疫苗荧光定量RT-PCR检测试剂盒的应用，其特征在于：该猪瘟兔化弱毒疫苗荧光定量RT-PCR检测试剂盒主要用于猪瘟疫苗生产中半成品的效力检验。

2.如权利要求1所述一种猪瘟兔化弱毒疫苗荧光定量RT-PCR检测试剂盒，其特征在于该试剂盒中含有：阳性对照和阴性对照，RT-PCR反应液、反应酶、探针溶液、无酶水，其中：

（1）阳性对照和阴性对照：采用猪瘟兔化弱毒疫苗标准毒株冻干样品作为阳性对照，MEM细胞培养液作为阴性对照。

（2）RT-PCR反应液：每个反应包括10×PCR Buffer5μL、dNTP Mixture（2.5μM each）1.5μL、10μM HCLV-F1.5μL、10μM HCLV-R2μL，共10.0μL；其引物序列如下：

HCLV-F：5’-CCGCCAGTAGGACCCTAT-3’

HCLV-R：5’-GTGTAGTGTGGTAACTTGAGGTA-3’

（3）反应酶：每个反应包括SSⅢ^TM反转录酶0.3μL、Taq HS DNA聚合酶0.5μL，共0.8μL；

（4）探针溶液：每个反应需3μL，该探针序列为

HCLV-P：5’-FAM-AGATAACACTAATTTTCTTTTTTCTTT-MGB-3’

其中：FAM为羧基荧光素;MGB为小沟结合子；

（5）无酶水：超纯水高压灭菌后，加入终浓度为0.1%的焦碳酸二乙酯（DEPC），处理过夜，次日高压灭菌以去除DEPC。