[发明专利]一种快速区分稻曲病菌交配型的分子检测方法

权利要求书

1.一种快速区分稻曲病菌（Villosiclava virens）交配型的分子检测方法，包括收集待检菌丝和组织样品，采用CTAB法提取所需检测样本的基因组DNA，用0.7%的琼脂糖凝胶电泳进行分析，PCR扩增，使用凝胶成像系统记录电泳结果，利用标记判断DNA片段的大小，其特征在于，检测样本为：稻曲病菌分生孢子单孢菌株或子囊孢子单孢菌株或菌核，所述的PCR扩增为多重PCR扩增，在多重PCR扩增体系中涉及的两对扩增引物是Vm1-F/Vm1-R和Vm2-F/Vm2-R，其中，Vm1-F为SEQ ID NO.1，Vm1-R为SEQ ID NO.2， Vm2-F为SEQ ID NO.3 ，Vm2-R为SEQ ID NO.4。

2.根据权利要求1所述的一种快速区分稻曲病菌交配型的分子检测方法，其特征在于，多重PCR扩增体系为：不含Mg²⁺的10×PCR Buffer，5uL；浓度为25mM的MgCl₂，3μL；dNTP Mixture(2.5mM each)，4 μL；浓度为1-5ng/μL的模板DNA，1μL；浓度为10mM的引物Vm1-F和Vm1-R 以及引物Vm2-F和Vm2-R，各1 μL；Taq DNA聚合酶，0.25μL；d₂H₂O补足至50μL；PCR扩增程序为：94°C，5min；然后依序循环进行94°C，30s；65.4°C，30s；72°C，30s，循环次数为35次；再72°C，5min；4°C保存。

3.根据权利要求1或2所述的一种快速区分稻曲病菌交配型的分子检测方法，其特征在于，MAT1-1交配型稻曲病菌分生孢子单孢菌株、子囊孢子单孢菌株和含有MAT1-1交配型菌丝的菌核可得到180bp左右的DNA条带，MAT1-2交配型稻曲病菌分生孢子单孢菌株、子囊孢子单孢菌株和含有MAT1-2交配型菌丝的菌核可得到280bp左右的DNA条带，据此获得被测稻曲病菌分生孢子单孢菌株、子囊孢子单孢菌株或菌核的交配型；

稻曲病菌MAT1-1和MAT1-2交配型单孢菌株可配合进行有性繁殖；同时含有MAT1-1和MAT1-2交配型菌丝的稻曲病菌菌核可萌发形成子座并产生子囊孢子，为可育菌核；仅含有MAT1-1交配型菌丝的菌核不能萌发产生子座，为不可育菌核。