[发明专利]一种以马尾松离体成熟胚为外植体的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种以马尾松离体成熟胚为外植体的组织培养方法，属于木本植物组织培养技术领域。

背景技术

马尾松原产我国，是秦岭以南各省重要的荒山绿化、造纸原料林和采脂林、自然风景林的重要树种之一，是我国分布面积最广的树种。其生长迅速，生产力高，适应性强。力学性质好等特点，也广泛被用于建筑、坑木、枕木、桥梁等工程，也可作为纤维板、刨花板、胶合板工业的原料，具有重要的经济价值。目前马尾松良种主要以种子园和母树林的有性繁殖为主。然而，有性繁殖存在着分化的问题，不能最大限度地提高遗传改良增益，而无性繁殖却能克服有性繁殖的上述不足。但马尾松的传统无性繁殖技术(扦插和嫁接)目前仍难满足造林的需求，制约了马尾松良种繁育的进程。

采用组织培养技术繁殖植物可以得到很高的繁殖效率，植物组织培养技术是利用植物细胞全能性(即每个细胞具有该植物的全部遗传信息，在一定培养条件下离体细胞具有发育成完整植株的潜在能力)，采取植物体内的细胞团、分生组织或营养器官的微小部分，通过人工配制不同营养成分和激素调控，使这些组织细胞形成成千上万小植株并且保持母体内全部优良遗传性状，此种方法可在短时间内获得大量试管苗，可在车间内进行，实施工厂化生产，获得的幼苗存放在人工控制的培养室内，可一年四季进行生产。而且在极少的面积内进行大规模生产，因而不占用土地。如果利用组织培养技术繁殖马尾松，不仅为扩大繁殖马尾松良种提供了一个新的途径，也可为马尾松分子设计育种创造条件，意义重大。

然而马尾松组织培养较难，诱导产生的芽不易分化伸长，且小苗生根率极低。黄健秋、卫志明等对马尾松成熟胚进行体细胞胚胎诱导并获得再生植株，共诱导产生27个子叶胚，最终只产生2株完整小植株，其余均只能稍伸长或停止生长，体细胞胚转换成小植株的频率仅为7.4％；张宇对马尾松进行组织培养，有一定的芽诱导率，但生根率仅为70％，无法满足生产的要求。为此，本发明旨在研制适于马尾松成熟胚作为外植体的高效繁殖技术。

发明内容

本发明要解决技术问题是：克服现有技术存在的问题，提供一种繁殖系数高的、快速的以马尾松离体成熟胚为外植体的组织培养方法，包括以下步骤：

1、不定芽诱导

将马尾松离体成熟胚接种到诱导培养基上，培养20天左右，待培养物诱导出芽原基后，即开始下一阶段。

2、芽的分化与伸长

将第1步所得的培养物转移到分化培养基上，培养数天，待分化出小芽后，即可将小芽接种到芽伸长培养基上进行芽的伸长，培养30-40天，待小苗长到常规生根程序所需高度时，进入下一步。

3、生根

将第2步所得的小苗齐根取下，转至常规生根培养基中，黑暗条件下培养7天，再转入光照培养21-28天，小苗根部开始出现白色的短根，此时，将生根小苗移到根伸长培养基中，之后培养30天左右，即可移栽长成正常的马尾松植株。

上述技术方案中，所述诱导培养基的成份为DCR常规基本培养基、6-苄基嘌呤0.5-2毫克/升、萘乙酸0.05-0.15毫克/升或吲哚丁酸0.05-0.15毫克/升、蔗糖30克/升。

上述技术方案中，所述分化培养基的DCR常规基本培养基、成份为6-苄基嘌呤0.5毫克/升、吲哚丁酸0.05毫克/升、蔗糖30克/升以及琼脂5.6-6.0克/升。

上述技术方案中，所述芽伸长培养基的成份为DCR常规基本培养基、萘乙酸0.01-0.1毫克/升或吲哚丁酸0.01-0.1毫克/升或活性炭0-2.0克/升、蔗糖30克/升。

上述技术方案中，所述生根培养基的成份为1/2DCR常规基本培养基、萘乙酸0.5-2.0毫克/升或吲哚丁酸0.5-2.0毫克/升、蔗糖20克/升。

上述技术方案中，所述根伸长培养的成分为DCR常规基本培养基、活性炭0.5克/升。