[发明专利]源于雷氟松氏菌的短链脱氢酶、编码基因、载体、工程菌及应用

说明书

（一）技术领域

本发明涉及一种短链脱氢酶，特别涉及一种来源于雷氟松氏菌（Leifsonia xyli HS0904）菌株的短链脱氢酶基因、酶、重组表达载体、基因工程菌，及其在制备手性醇中的应用。 

（二）背景技术

短链脱氢酶/还原酶广泛存在于植物、动物及微生物中。短链脱氢酶/还原酶（short-chain dehydrogenases/reductases,SDR）可催化诸如3,5-双三氟甲基苯乙酮、对三氟甲基苯乙酮、4-羟基-2-丁酮、乙酰乙酸乙酯、4-氯乙酰乙酸乙酯和乙酰乙酸叔丁酯等的不对称还原制备得到相应的(R)-3,5-双三氟甲基苯乙醇、对三氟甲基苯乙醇、2-羟基-丁醇、3-羟基丁酸乙酯、4-氯-3羟基丁酸乙酯和3-羟基丁酸叔丁酯等手性化合物，这些手性化合物在医药、化工等领域具有重要的作用。 

目前已有不同来源的短链脱氢酶/还原酶基因分别被克隆和测序，并且实现了在不同宿主中的表达。然而野生型短链脱氢酶/还原酶活力较低，限制了其大规模的制备及应用，因此，构建表达活性高的短链脱氢酶/还原酶基因工程菌具有实际的应用意义。 

（三）发明内容

本发明目的是提供一种来源于雷氟松氏菌（Leifsonia xyli HS0904）菌株的短链脱氢酶、编码基因、重组表达载体、基因工程菌，及其在制备手性醇中的应用。 

本发明采用的技术方案是： 

本发明涉及一种来源于雷氟松氏菌（Leifsonia xyli HS0904）的短链脱氢酶基因，所述基因具有与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列90%以上同源 性，优选所述基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。所述雷氟松氏菌（Leifsonia xyli HS0904）已在中国发明专利ZL201010523043.X中公开，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，邮编：430072；保藏编号为CCTCC M2010241，保藏日期：2010年9月21日。 

该序列由如下方法获得： 

利用PCR技术，在引物1（ATGGCNCARTAYGAYGTNGC，R=A/G，Y=C/T，N=A/G/C/T）、引物2（YYAYTGNGCNGTRTAKCCYCC，R=A/G，Y=C/T，K=G/T，N=A/G/C/T）的作用下，以来源于雷氟松氏菌（Leifsonia xyli HS0904）菌株的总基因组DNA为模板，克隆得到约750bp的短链脱氢酶基因片段。将该片段连接到pMD19-T载体上获得克隆载体pMD19-T-SDR，将含有目的基因的载体pMD19-T-SDR转化至大肠杆菌DH5α获得含pMD19-T-SDR的重组大肠杆菌DH5α/pMD19-T-SDR。 

对重组质粒进行测序，利用软件对测序结果进行分析，结果表明该序列含有一个长为756bp的开放阅读框，该基因核苷酸序列为SEQ IDNO.1： 

  1 ATGGCGCAGT ACGACGTGGC CGGACGGTCC GCGATCGTGA CCGGAGGCGG 

 51 CTCGGGCATC GGGCGCGCCA TCGCCCTCAC CCTCGCGGCG AGCGGAGCGG 

101 CCGTCCTCGT CACCGACCTG AACGAGGAAA ACGCAAATGC CGTCGTGGCG 

151 GAGATCAGCG CCGCGGGCGG CACCGCGCGG GCACTCGCCG GCGATGTGAC 

201 CGACCCGGCC TTCGCCGAGG CCAGCGTCGC GGCCGCGAAC GAGCTGGCCC 

251 CGCTGCGCAT CGCCGTCAAC AACGCCGGCA TCGGCGGAGC GGCAGCACCG 

301 GTCGGCGACT ACCCGCTCGA CTCGTGGCGC AAGGTCATCG AGGTCAACCT 

351 CAACGCCGTC TTCTACGGGA TGCAGGCGCA GCTCGACGCG ATCGGCGCGA 

401 ACGGCGGCGG CGCGATCGTC AACATGGCGT CCATCCTGGG CAGCGTCGGC 

451 TTCGCCAACT CGTCGGCGTA CGTCACCGCG AAGCACGCGC TGCTCGGCCT