[发明专利]检测人GFAP蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于多肽化学和免疫学领域，具体涉及人胶质纤维酸性蛋白（GFAP）抗原表位肽、用该抗原表位肽制备的GFAP特异性抗原和相应的单克隆抗体或多克隆抗体、所述抗体在制备人GFAP体外诊断试剂盒上的用途，人GFAP体外诊断试剂盒，以及一种用于定量检测待测物中人GFAP蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法。

背景技术

近年来，对神经生化标志物的研究已引起许多研究者的注意,寻找一种可靠的、非侵入性的、能反映中枢神经系统损害范围及预后的生化标志物是众多研究者的共同心愿。通过对血液和脑脊液（CSF）的研究，目前已经发现一些生化标志物可以用来判断神经系统的损害范围以及对预后进行预测，这在疾病的早期要优于CT以及MRI等影像学检查。其中，胶质纤维酸性蛋白（GFAP）就是这样一种生化标志物。

胶质纤维酸性蛋白（GFAP）是一种分子量为50-52KDa的酸性蛋白，其属于细胞骨骼蛋白，是星形细胞的标志蛋白，在星形细胞中有丰富的、唯一的表达。胶质纤维酸性蛋白是成熟星形胶质细胞特有的中间丝成分，其对神经生理功能和各种病理的发展过程具有重要的作用。

在正常情况下，GFAP受星形胶质细胞的动力调节。损伤后增生的GFAP阳性星形胶质细胞能促进星形胶质细胞的有丝分裂，并使原始祖细胞分化成为成熟的星形胶质细胞。各种中枢神经系统损伤均可引起星形胶质细胞反应。星形胶质细胞反应的标志为细胞数增加，细胞体肥大，星形胶质细胞分支增多，并且GFAP的表达增强。因此，GFAP可以作为中枢神经系统损伤范围及预后的生化标志物。此外，GFAP在神经胶质瘤中的表达也会出现异常，因此其也可以作为反映神经胶质瘤的恶性程度的特异性标志物。

研究发现，GFAP与神经系统病理过程（如脑外伤、脑梗死、脑卒中、神经退行性病）有明显的相关性。当患者的中枢神经系统发生损伤时，GFAP从受损伤的神经胶质细胞中溢出，进入细胞间液，可溶性的GFAP由细胞间液进入脑脊液，穿过破坏的血脑屏障进入血液循环。因此，可以由患者血清中的GFAP水平来判断神经系统损伤的病情及预后。

检测血清中的GFAP水平的最理想的方法为免疫检测。因此，寻找合适的具有免疫原性的GFAP抗原表位肽、制备特异性的GFAP抗原及抗体即成为了重点。

荧光免疫层析方法测血液中的待测物操作简便、快速，只需10分钟就能完成样品检测，并且检测范围宽，灵敏度好，能够迅速及时地帮助诊断病情，监测预后。中国专利申请No.200910117820.8公开了一种荧光微球免疫层析试纸条的制备方法及定量检测方法；中国专利申请No.200910047352.1公开了一种荧光免疫层析试纸及其制备方法和应用。然而，目前还没有针对人GFAP蛋白的荧光免疫层析试纸。

发明内容

为解决上述现有技术中所存在的问题，本发明提供了一种用于定量检测待测物中人GFAP蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法。

具体而言，本发明提供了：

一种用于定量检测待测物中人GFAP蛋白的荧光免疫层析试纸，该试纸通过双抗体夹心法检测所述人GFAP蛋白，其中：

所述双抗体夹心法采用标记有荧光微球的第一GFAP单克隆抗体作为捕获抗体，所述第一GFAP单克隆抗体来源于人GFAP抗原表位肽(1)和(2)中的一者；并且

所述双抗体夹心法采用第二GFAP单克隆抗体作为检测抗体，所述第二GFAP单克隆抗体来源于人GFAP抗原表位肽(1)和(2)中的另一者；

所述人GFAP抗原表位肽(1)和(2)分别为：

(1)Thr-Val-Arg-Gln-Lys-Leu-Gln-Asp-Glu-Thr-Asn-Leu-Arg-Leu-Glu-Ala-Glu-Asn-Asn-Leu-Ala-Ala-Tyr；

(2)Tyr-Gln-Glu-Ala-Leu-Ala-Arg-Leu-Glu-Glu-Glu-Gly-Gln-Ser-Leu-Lys-Asp。

优选地，所述第一GFAP单克隆抗体是由第一GFAP抗原制备而成的，该第一GFAP抗原是通过使所述人GFAP抗原表位肽(1)和(2)中的一者与载体蛋白偶联制备而成的；并且

所述第二GFAP单克隆抗体是由第二GFAP抗原制备而成的，该第二GFAP抗原是通过使所述人GFAP抗原表位肽(1)和(2)中的另一者与载体蛋白偶联制备而成的。

优选地，所述荧光微球的粒径为320nm至400nm。