[发明专利]一种将人脂肪间充质干细胞诱导成神经细胞的诱导培养基及方法

权利要求书

1.一种将人脂肪间充质干细胞诱导成神经细胞的诱导培养基，其特征在于：由A液、B液、C液组成，采用如下方法配制而成：

A液：8～12ug bFGF溶于500ml人间充质干细胞无血清培养基中，过滤除菌，即得A液，其中bFGF浓度16～24ng/ml；

B液：10ml～20ml香丹注射液加入到490～480ml人间充质干细胞无血清培养基中，混合后总体积为500ml，即得B液，其中香丹注射液体积终浓度为2％～4％；

C液：4～8ug bFGF、4～8ug EGF、40～60ug BDNF、80～120ug GM1溶于500ml人间充质干细胞无血清培养基中，即得C液，其中bFGF终浓度8～16ng/ml，EGF终浓度8～16ng/ml，BDNF终浓度80～120ng/ml，GM1终浓度160～240ng/ml。

2.一种采用权利要求1所述的诱导培养基将人脂肪间充质干细胞诱导成神经细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)、制备脂肪间充质干细胞；(2)、脂肪间充质干细胞的鉴定：取P3代脂肪间充质干细胞，流式细胞仪检测细胞表面标记；(3)、诱导脂肪间充质干细胞分化为神经细胞：先用A液预诱导24h，然后B液诱导6h，PBS洗涤，最后C液诱导分化5d；(4)、诱导后神经细胞鉴定：形态学观察法；免疫细胞化学法检测诱导后NeuN、β-TubulinIII、GFAP的表达情况，NeuN、β-TubulinIII表达阳性者为神经细胞，GFAP表达阳性者为神经胶质细胞；免疫荧光染色法检测诱导后细胞β-TubulinIII的表达情况，β-TubulinIII表达阳性为神经细胞。