[发明专利]基于表面增强拉曼光谱的尿液中克伦特罗的速测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种尿液中克伦特罗的检测方法，尤其涉及一种基于表面增强拉曼光谱的尿液中克伦特罗的速测方法。

背景技术

克伦特罗是一种β-肾上腺素能受体激动剂类化合物（以下简称：β-受体激动剂），在人医临床上常被用作平喘药物，用于调节支气管扩张和平滑肌松弛，治疗呼吸系统疾病。由于对动物具有一定的促进生长、提高瘦肉率的作用，而被称之为“瘦肉精”。农业部176号和1519号公告明确规定的禁止在养殖动物上使用克伦特罗，但仍有不法分子受利益驱使非法使用克伦特罗，国内外屡屡发生以克伦特罗为代表的“瘦肉精”中毒事件。为保障人民群众身体健康，对“瘦肉精”类药物非法使用的监管非常重要。

目前，检测克伦特罗的方法主要有酶联免疫试剂盒(ELISA)、试纸条、液质联谱(HPLC-MS)、气质联用(GC-MS)等方法。其中，气相色谱-质谱法需要对克伦特罗进行衍生化处理，操作复杂，且衍生化反应多不稳定，检测灵敏度不高；液相色谱-串联质谱灵敏度高，但设备相对昂贵，且前处理复杂，检测时间长；现有的ELISA快速筛选法虽然较为简便，但该法受环境条件的限制，常常出现“假阳性”情况，给检测工作带来不便。

SERS（Surface-enhanced Raman Spectroscopy,表面增强拉曼光谱）具有速度快、灵敏度高等特点，它能检测到吸附于金属表面的小分子化合物，给出丰富的分子结构信息，适合现场快速检测。

有关克伦特罗等β-受体激动剂的SERS速测方法也有相关报道，如Izquierdo-Lorenzo I.等曾报道利用SERS检测克伦特罗、沙丁胺醇等三种β-受体激动剂的标准溶液，发现其方法的可行性，但检测灵敏度不高（克伦特罗检测限70ng.mL^-1），而且该报道没有研究在基质中克伦特罗等的SERS检测方法，无法满足实际监管的需求；Guichi Zhu等利用SERS结合免疫的分析方法测定猪尿液中克伦特罗，方法灵敏度高（1pg.mL^-1），但该方法基于免疫学的原理，前期需要制备特异性抗体，周期较长，增强试剂制备方法较为复杂，检测周期较长。

发明内容

本发明的目的是提供一种操作时间短、重复性好、灵敏度高、能实现现场快速检测的基于表面增强拉曼光谱的尿液中克伦特罗的速测方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明的基于表面增强拉曼光谱的尿液中克伦特罗的速测方法，包括步骤：

A、样品前处理：

采用二氯甲烷或乙酸乙酯作为提取溶剂，获得待测尿液的提取液，所述待测尿液与提取溶剂的体积比为1：1；

采用酸性水溶液和有机溶剂为净化萃取溶剂对所述提取液进行液液萃取，获得待测液，所述有机溶剂为二氯甲烷或乙酸乙酯；

B、制备检测试剂：

向纳米金胶体溶液或者纳米银胶体溶液中加入前处理后的待测液，加入酸性溶液调节体系PH＜7，随后加入含有NO₃^-、Cl^-的凝聚剂，使纳米粒子聚集，涡旋混合均匀后，混合液为最后的上机检测液；

C、定性检测：

采用激光能量200mw的785nm激光源拉曼光谱对所述上机检测液进行扫描，以位移1258±2cm^-1、1470±2cm^-1、1601±2cm^-1为判定克伦特罗的特征峰；

D、定量检测：

以1450±2cm^-1对应峰强度进行谱图归一化，以1470±2cm^-1对应峰强度进行克伦特罗含量计算。

由上述本发明提供的技术方案可以看出，本发明实施例提供的基于表面增强拉曼光谱的尿液中克伦特罗的速测方法，采用二氯甲烷或乙酸乙酯作为提取溶剂，采用酸性水溶液和有机溶剂为净化萃取溶剂对提取液进行液液萃取，以纳米金胶溶液或者纳米银胶溶液为增强试剂，建立了尿液中克伦特罗的SERS快速检测方法，前处理操作时间短、重复性好、灵敏度高（1ng.mL^-1）,能实现现场快速检测，满足监管需求。

附图说明

图1为本发明实施例中尿液中克伦特罗浓度为5ng.mL^-1的拉曼光谱图；

图2为本发明实施例中尿液中克伦特罗浓度为0、1、2、5、10ng.mL^-1的拉曼光谱图；